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时间:2018-05-04
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1、体外镁合金与小鼠成骨细胞联合培养观察.L.编辑。【摘要】观察镁合金与小鼠成骨细胞体外联合培养后,小鼠成骨细胞的活力、组织形态变化及生长扩增情况。由此验证镁合金与成骨细胞的生物相容性和骨传导特性,探讨镁合金成为一种新型骨科内置物材料的可行性。[方法]将小鼠成骨细胞体外扩增培养,并应用钙钴法及VonKossa法检测碱性磷酸酶加以验证。传代后将成骨细胞与镁合金金属片体外复合培养,细胞密度为3×104/ml。培养24、48、72h后,分别进行扫描电镜(SEM)、共聚焦显微镜观察细胞形态学变化及生长情况。[结果]小鼠成骨细胞体外培养后大量扩增,细胞特性稳定。与镁合金
2、复合培养后,细胞保持良好的活性和分裂增殖能力。SEM观察:细胞粘附明显,增殖分化良好;共聚焦显微镜观察:随时间段的延长,细胞形态完整,轮廓清晰,增殖明显。[结论]镁合金与小鼠成骨细胞具有良好的生物相容性,镁合金对成骨细胞具有良好的骨传导特性。因此,镁合金成为一种新型的骨科内置物材料具有较强的可行性。【关键词】镁合金成骨细胞生物相容性Abstract:[Objective]Toobservemouseosteoblastsvitality,histomorphologyandgroentinvitroco-culturebinedagnesiumalloys
3、,confirmthebiopatibilityofmagnesiumalloysandosteoblasts,andtrytofindoutthepossibilityofmagnesiumalloystobeaneplantmaterial.[Method]MouseosteoblastsoriandVonkossastained,culturedanddevelopedinvitro.Thentheosteoblastsixedagnesiumalloysinacelldensityof3×104/ml.After24、48、72hourscocu
4、lture,thesurfaceofmagnesiumalloysicroscopy(SEM)andconfocalmicroscopytofindthechangeofosteoblasts.[Result]Aftercultureinvitro,theosteoblastsagnesiumalloys,thecellsadheredandproliferatedonthesurfaceofalloysverySEMandconfocalmicroscopyobservation,alloysshoouseosteoblasts,sothemagnesi
5、umalloyisverypossibletobeaneplantmaterial.Keyagnesiumalloy;osteoblast;biopatibility镁合金作为一种可降解金属材料,近年来成为新型的骨科内置物领域的研究热点。本研究用小鼠成骨细胞与镁合金体外联合培养的方法,并与生物相容性好、可降解的多聚乳酸(PLA)作比较,初步评价其生物相容性及骨诱导性,从而为进一步动物体内实验做准备。1材料与方法1.1材料准备1.1.1镁合金金属片镁合金由镁(98%)、锰(1%)、锌(1%)组成,制成直径8mm,厚度1mm的圆形薄片。中国科学院金属研究所提供
6、。高温高压消毒后备用。PLA膜片PLA膜片:分子质量19kd,孔径<5μm,制成直径8mm,厚度200μm的圆形薄片。武汉工业大学生物材料研究所提供。紫外消毒后备用。小鼠成骨细胞的制备1.2.1细胞营养液配制培养液使用DMEM低糖培养基(Gibco)加入20%灭活胎牛血清(杭州四季青),青霉素100U/ml,链霉素100U/ml;细胞消化液用胰蛋白酶(1∶250,Sigma)溶解于d-hank’s液,过滤灭菌。1.2.2小鼠成骨细胞培养及检验 小鼠成骨细胞购自上海麦莎生物科技有限公司的MC3T3-E1小鼠成骨细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用钙钴法
7、和VonKossa法鉴定成骨细胞。取细胞生长融合成单层的盖玻片条,PBS冲洗3遍,2%硝酸钴浸泡5min,双蒸水冲洗2遍,浸入2%硫化铵溶液1min,双蒸水冲洗2遍,甘油明胶封固;另取一片细胞融合呈单层的盖玻片条,PBS清洗3遍,4%甲醛室温固定60min,再次PBS清洗2遍,加入新鲜配制的1%硝酸银,避光染色30min,置于紫外灯下60min,0.1%伊红复染。细胞培养扩增,当汇合到80~90%时,0.25%胰蛋白酶消化,1∶2传代,扩增至第5代。1.3成骨细胞与镁合金的体外联合培养将消毒后的15枚金属片与9枚PLA膜片PBS冲洗2次,浸入培养液,入37
8、℃、5%CO2培养箱中4h后取出置于24孔板中。其中扫描电镜组9枚
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