体外镁合金与小鼠成骨细胞联合培养观察

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1、体外镁合金与小鼠成骨细胞联合培养观察.L.编辑。【摘要】观察镁合金与小鼠成骨细胞体外联合培养后，小鼠成骨细胞的活力、组织形态变化及生长扩增情况。由此验证镁合金与成骨细胞的生物相容性和骨传导特性，探讨镁合金成为一种新型骨科内置物材料的可行性。［方法］将小鼠成骨细胞体外扩增培养，并应用钙钴法及VonKossa法检测碱性磷酸酶加以验证。传代后将成骨细胞与镁合金金属片体外复合培养，细胞密度为3×104/ml。培养24、48、72h后，分别进行扫描电镜（SEM）、共聚焦显微镜观察细胞形态学变化及生长情况。［结果］小鼠成骨细胞体外培养后大量扩增，细胞特性稳定。与镁合金

2、复合培养后，细胞保持良好的活性和分裂增殖能力。SEM观察：细胞粘附明显，增殖分化良好；共聚焦显微镜观察：随时间段的延长，细胞形态完整，轮廓清晰，增殖明显。［结论］镁合金与小鼠成骨细胞具有良好的生物相容性，镁合金对成骨细胞具有良好的骨传导特性。因此，镁合金成为一种新型的骨科内置物材料具有较强的可行性。【关键词】镁合金成骨细胞生物相容性Abstract：［Objective］Toobservemouseosteoblastsvitality,histomorphologyandgroentinvitroco-culturebinedagnesiumalloys

3、,confirmthebiopatibilityofmagnesiumalloysandosteoblasts,andtrytofindoutthepossibilityofmagnesiumalloystobeaneplantmaterial.［Method］MouseosteoblastsoriandVonkossastained,culturedanddevelopedinvitro.Thentheosteoblastsixedagnesiumalloysinacelldensityof3×104/ml.After24、48、72hourscocu

4、lture,thesurfaceofmagnesiumalloysicroscopy(SEM)andconfocalmicroscopytofindthechangeofosteoblasts.［Result］Aftercultureinvitro,theosteoblastsagnesiumalloys,thecellsadheredandproliferatedonthesurfaceofalloysverySEMandconfocalmicroscopyobservation,alloysshoouseosteoblasts,sothemagnesi

5、umalloyisverypossibletobeaneplantmaterial.Keyagnesiumalloy;osteoblast;biopatibility镁合金作为一种可降解金属材料，近年来成为新型的骨科内置物领域的研究热点。本研究用小鼠成骨细胞与镁合金体外联合培养的方法，并与生物相容性好、可降解的多聚乳酸（PLA）作比较，初步评价其生物相容性及骨诱导性，从而为进一步动物体内实验做准备。1材料与方法1.1材料准备1.1.1镁合金金属片镁合金由镁（98%）、锰（1%）、锌（1%）组成，制成直径8mm，厚度1mm的圆形薄片。中国科学院金属研究所提供

6、。高温高压消毒后备用。PLA膜片PLA膜片：分子质量19kd，孔径＜5μm,制成直径8mm,厚度200μm的圆形薄片。武汉工业大学生物材料研究所提供。紫外消毒后备用。小鼠成骨细胞的制备1.2.1细胞营养液配制培养液使用DMEM低糖培养基（Gibco）加入20%灭活胎牛血清（杭州四季青），青霉素100U/ml,链霉素100U/ml；细胞消化液用胰蛋白酶（1∶250，Sigma）溶解于d-hank’s液，过滤灭菌。1.2.2小鼠成骨细胞培养及检验　　小鼠成骨细胞购自上海麦莎生物科技有限公司的MC3T3-E1小鼠成骨细胞，倒置相差显微镜下观察细胞形态，应用钙钴法

7、和VonKossa法鉴定成骨细胞。取细胞生长融合成单层的盖玻片条，PBS冲洗3遍，2%硝酸钴浸泡5min，双蒸水冲洗2遍，浸入2%硫化铵溶液1min，双蒸水冲洗2遍，甘油明胶封固；另取一片细胞融合呈单层的盖玻片条，PBS清洗3遍，4%甲醛室温固定60min,再次PBS清洗2遍，加入新鲜配制的1%硝酸银，避光染色30min，置于紫外灯下60min,0.1%伊红复染。细胞培养扩增，当汇合到80～90%时，0.25%胰蛋白酶消化，1∶2传代，扩增至第5代。1.3成骨细胞与镁合金的体外联合培养将消毒后的15枚金属片与9枚PLA膜片PBS冲洗2次，浸入培养液，入37

8、℃、5%CO2培养箱中4h后取出置于24孔板中。其中扫描电镜组9枚