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1、虫生真菌关键酶的研究现状陈玉森1,吴国辉2,陈杭彬2,孙传英2(福建农林人学】植物保护学院2生命科学学院，福建福州350002)摘要：虫生真菌关键酶在真菌侵染寄主害虫的过程中发挥着重要作用，目前已成为菌物学家的一个研究热点。本文综述了虫生真菌蛋白酶、几丁质酶、肽酶、脂肪酶、脂肪氧化酶和DNA修复酶的研究现状，旨在为揭示真菌致病机理与开发应用提供参考。关键词：虫生真菌；关键酶；研究现状CurrentstatusofentomogenousfungalkeyenzymesCHENYu-sen1,WUGuo-hui2,CHENHang-bin2,S
2、UNChuan-ying2(Collegeof1PlantProtection2LifeScience,FujianAgriculture&ForestryUniv.,Fuzhou.Fujian350002,China)Abstract:Keyenzymesproducedbyfungiplayanimportantroleintheinfectionprogressofhostsinvadedbyentomogenousfungi,whichisbecomingoneofthefocalinterestswithinthemycologis
3、ts・Currentstatusofenzymessuchasproteases,chitinases,peptidases,lipases,lipoxygenasesandDNArepairenzymesfromentomogenousfungiwasreviewedinthispaper,whichcanfacilitatetheclarificationoffungalpathogenicmechanism,explorationandapplication.Keywords:Entomogenousfungus;Keyenzyme;R
4、esearchcurrentstatus在虫生真菌侵染寄主害虫的过程中，真菌hi于机械压(mechanicalpressure)和表皮降解酶(cuticle-degrdingenzymes)的联合作用而穿透寄主表皮是至关重要的一步山。在菌丝佼入前虫牛真菌芽管穿透表皮时会在侵染钉的周围形成透明圈，其原因是曾被吸收入靶标结构的表皮降解酶种进行性地将聚合物降解为可利用的单体询体。显而易见的候选催化酶是能影响蛋白质、几丁质、蜡脂、其他外骨骼层、昆虫组织以及血腔和血淋巴。此外，辐射和口由基能够缓和包括涉及到DNA修复酶的多种反应，同时这些酶在虫生真菌适
5、应和进化方面起关键作用。1蛋白酶与肽酶虫生真菌的蛋白水解酶在昆虫致病机理中冇表皮降解、血淋巴中的酚氧化酶的激活和毒性等作用。虫生真菌如粉虱朋壳砲菌、球砲白僵菌、布氏白僵菌、冠状虫霉、疫霉、人链第一作者简介：陈玉森(1963-),男，高级实验师，研究方向：真菌学(E-mail:Chenysl963@163.com)基金项目：国家自然科学基金项目(30500005);福建省科技计划重点项目(2006S0002);福建省自然科学基金项目(B0610007);福建省科技计划项目(2007F5022);福建省教育厅项目(JA09085)壶菌、莱氏野村菌
6、、金龟子绿偎菌和蜡蛤轮枝菌的蛋白降解酣包括蛋白他、胶原酣和凝乳弹性蛋白酶已经鉴定和揭示特性⑦讥虫生真菌的蛋白酶和肽酶对腐生生长也需要。研究表明胞外类枯草杆菌丝氨酸内切蛋白酶(PH)是虫生真菌的一个关键毒力因了并在附着胞形成和致病期间上调，菌丝出现在表皮表面和在虫尸表面产沦时情况也是如此⑷。另据报道，以儿丁质为底物，加入基木盐培养基中，诱导球泡口僵菌产牛•分解昆虫表皮的蛋口酶。诱导物中，蝉蜕诱导的蛋白酶总活性、比活较高，经超滤、离子交换层析、亲和层析、制备性IEF电洗脱纯化了一种冇凝乳弹性蛋白酶(Prl)活性的蛋白酶BbPrlo经SDS-PAG
7、E电染后呈单带。HPLC凝胶过滤显示单峰。BbPrl为单体臨分子量为33.6KDa左右，PI为7.4。底物专一-性测定显示,BbPrl能水解Phe或Leu形成的酰胺键和肽键⑸。以蝉蜕为底物诱导绿個菌产牛分解昆虫外壳蛋口酶。发酵液经超滤、凝胶层析、制备IEF电泳，纯化了一•种蛋口酶MAP-21,SDS-PAGE电泳后经银染色呈单带。该酣的Mr为27kDn左右,pl为7.6。它的特显识别氨基酸为Arg,其活性可被PMSF和TLCK抑制，表明其活性中心冇Ser和His残基。专一底物和抑制剂特性试验结果表明MAP-21是类胰蛋白酶⑹。通过比较根虫'&
8、^Zoophthoraradicans3个菌株在不同培养条件下诱导胞外蛋口酶的差异，发现在含昆虫表皮和明胶的培养基屮，均能诱导表达高水平的胞外蛋口酶，而在营养缺乏的
