双酶切Buffer说明

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1、DoubleDigestion(双酶切反应)时UniversalBuffer(通用缓冲液)的使用表■说明使用二种酶同时进行DNA切断反应(DoubleDigestion)时，为了节省反应时间，通常希望在同一反应体系内进行。Takara采用UniversalBuffer表示系统，并对每种酶表示了在各UniversalBuffer中的相对活性。尽管如此，在进行DoubleDigestion时，有时还会难以找到合适的UniversalBuffer。本表以在pUC系列载体的多克隆位点处的各限制酶为核心，显示了在Dou

2、bleDigestion可使用的最佳UniversalBuffer条件。在本表中，各UniversalBuffer之前表示的[数字×]是指各UniversalBuffer的反应体系中的最终浓度。Takara销售产品中添附的UniversalBuffer全为10倍浓度的缓冲液。终浓度为0.5×时反应体系中的缓冲液则稀释至20倍，1×时稀释至10倍，2×时稀释至5倍进行使用。 ■注意◇1μgDNA中添加10U的限制酶，在50μl的反应体系中，37℃下反应1小时可以完全降解DNA。◇为防止Star活性的产生，请将反

3、应体系中的甘油含量，尽量控制在10%以下。◇根据DNA的种类，各DNA的立体结构的差别，或当限制酶识别位点邻接时，有时会发生DoubleDigestion不能顺利进行的可能。EnzymeAcc IBamHIBglIICla IEcoRIEcoRVHincIIHindIIIKpn INco INde IAcc I－0.5×K1×T1×M1×M0.5×K1×M1×M1×M1×M+BSA1×TBamHI0.5×K－1×K1×K1×K1×K0.5×K1×K0.5×K1×K+BSA1×KBgl II1×T1×K－1×H

4、1×H1×H2×K1×K1×T1×K+BSA1×HCla I1×M1×K1×H－1×H1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HEcoRI1×M1×K1×H1×H－1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HEcoRV0.5×K1×K1×H1×H1×H－2×T1×K0.5×K1×K+BSA1×HHincII1×M0.5×K2×K1×M1×M2×T－1×M1×M1×M+BSA1×THindIII1×M1×K1×K1×M1×M1×K1×M－1×M1×K+BSA1×KKpn I1×M0.5×K1×T1×M1×M0

5、.5×K1×M1×M－0.5×K+BSA1×TNco I1×M+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×K+BSA1×M+BSA1×K+BSA0.5×K+BSA－1×K+BSANde I1×T1×K1×H1×H1×H1×H1×T1×K1×T1×K+BSA－Not I0.5×K+BSA0.5×K+BSA1×H+BSA1×H+BSA1×H+BSA1×H+BSA0.5×K+BSA0.5×K+BSA0.5×K+BSA0.5×K+BSA1×H+BSAPst I1×M1×K1×H1×H1×H1×

6、H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HPvu I0.5×K1×K1×K1×K1×K1×K0.5×K1×K0.5×K1×K+BSA1×KSac I1×M0.5×K0.5×K1×M1×M0.5×K1×M1×M1×L0.5×K+BSA1×TSal I1.5×T1.5×T1×H1×H1×H1×H1.5×K1.5×K1.5×T+BSA1.5×T+BSA1×HSma I1×T+BSA0.5×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA0.5×K+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×T+BSA1×

7、T+BSASpe I1×M1×K1×H1×M1×H1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×HSph I0.5×K1×K1×H1×H1×H1×H2×T1×K0.5×K1×K+BSA1×HXba I1×M0.5×K2×T1×M1×M2×T1×M1×M1×M1×M+BSA1×TXho I1×M1×K1×H1×H1×H1×H1×M1×M1×M1×K+BSA1×H EnzymeNot IPst IPvu ISac ISal ISma ISpe ISph IXba IXho IAcc I0.5×K+BSA1×M0.5×

8、K1×M1.5×T1×T+BSA1×M0.5×K1×M1×MBamHI0.5×K+BSA1×K1×K0.5×K1.5×T0.5×T+BSA1×K1×K0.5×K1×KBgl II1×K+BSA1×H1×K0.5×K1×H1×T+BSA1×H1×H2×T1×HCla I1×K+BSA1×H1×K1×M1×H1×T+BSA1×M1×H1×M1×HEcoRI1×K+BSA1×H1×K1×M1×H1×T+B