猕猴桃遗传转化研究进展

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1、中国农业大学课程论文獗猴桃遗传转化研究进展姓名：学号：H20110376专业班级：国经们04中国青岛2013年8月狒猴桃遗传转化研究进展徐启憩摘要：本文从獗猴桃目的基因的提取与克隆，遗传转化的方法及影响其转化效率的因素等方而迹行了综述，并对猫猴桃遗传转化研究中存在的主要问题进行了讨论。关键词：獗猴桃；遗传转化；研究进展獗猴桃属丁•獗猴桃科獗猴桃属的多年牛落叶藤本植物，其果实营养丰富，人体必需的矿物质、纤维素和维牛素含量较高。此外，还具有药用价值，有水果Z王Z美誉。要获得高品质的獗猴桃，遗传转化无疑成为一种有效的现代生物技术。獗猴桃属雌雄异株，倍性复杂,雌雄株间花期不

2、遇使种间杂交困艰育种周期长，且有不确定性。因此，需要引进新的手段和方法进行育种。目前，琳猴桃的遗传转化已取得很大进步，本文就琳猴桃遗传转化方血的研究进展做一综述。1已分离与克隆的密猴桃目的基因目前已被分离和克隆的口的基凶，主要与缽猴桃果实成熟及衰老过程有关。从1993年开始，肋cDiemnid和任小林等分别成功地从猫猴桃果实屮分离和克隆出ACC氧化酶基因，导入琳猴桃，均可增强称猴桃的耐贮藏性。1997年王春霞等建立了市根癌农杆菌介导的西瓜高效遗传转化系统，來控制植株的寿命和果实早熟或耐储藏性。2003年宋喜贵等利川从番茄果实屮分离到的ACC合成酶cDNA基因反向置于

3、CaMV35S启动子的控制之下，并转入美味獗猴桃的愈伤组织屮从而延缓植株衰老并提高其耐贮藏性。Atkinson等从美味獗猴桃中分离克隆出PG基因。任小林等还从美味獗猴桃中克隆了钙调蛋白cDNA。徐昌杰等从中华獗猴桃分离出的ACC合成酶家族四个成员的基因组DNA片段。2密猴桃遗传转化的方法遗传转化主要是将外源基因导入受体细胞屮，使之发生定向的遗传变异。通常利川重组DNA,组织培养或种质系统转化等技术，其方法主要有农杆菌介导法、花粉管通道法等。B前，在猫猴桃遗传转化中应用的方法主要有农杆菌介导法、基因枪法、DNA直接摄取法等。2.1农杆菌介导转化法包括根癌农杆菌和发根农

4、杆菌介导法。该方法研究较成熟。农杆菌介导法获得稳定转化体的频率更高FL車复性更好。2.2基因枪介导转化法乂称微弹轰击法，其将外源DNA片段包裹在微小金粒或钩粒表而，然后在高压作用下将微粒高速射入植物细胞或纽织中，微粒上的外源DA进入细胞后幣合到植物染色体上，得到阳性表达从而实现基因转化。樊军锋等利川叶圆盘法和基因枪相结合，进行了秦美獗猴桃双价耐盐基因的转化研究并获得抗性转化植株。2.3DNA直接摄取法DNA直接摄取法是将植物原生质体和外源DNA共培养，通过一定的化学和物理处理，使DNA进人植物细胞并得以农达。常见的有聚乙二醇法、电场诱导法等，通过改变细胞膜的通透性

5、从而使原生质体获得转化。Oliver等以原生质体为受体系统，将外源基因cat（氯霉素磷酸转移酶）用电激法利PEG法转化美味獗猴桃原牛质体获得成功。3獗猴桃遗传转化的影响因素3.1农杆菌菌株3.1.1菌株自身的影响因素不同农杆菌菌株对獗猴桃侵染力有一定的差异，这些影响因素包括农杆菌的趋向能力；农杆菌表而存在不适合的成分阻止农杆菌对植物细胞的附着；农杆菌外膜信号受体蛋白不能有效地识别植物细胞分泌的诱导分子等。研究表明A281略好于C58,C58的感染力强于RHA1O1,而LBA4404的转化频率最差。但由TLBA4404菌株广谱性好，且易于保存繁殖，所以常川来进行獗猴桃

6、转化研究。狒猴桃遗传转化的研究人多数都是农杆菌介导的，毕静华等对阔叶猫猴桃遗传转化的研究就是用农杆菌介导的。刘春林等获得的抗卡那霉索的美味獗猴桃抗性苗也是用根癌农杆菌介导的。3.1.2外界的影响因素一般认为外植体在侵染前预培养一段时间，可以提高转化效率，然而在杜仲遗传转化中，预培养不但不能提高转化效率，反而降低了转化效率oJanssen和Gardner研究发现獗猴桃叶片外植体经预培养后也降低了GUS瞬时表达率。刘婕等通过对蓝浆果农杆菌介导法基因转化条件的研究充分证明了外部条件対Gus基因瞬时表达率的影响。尚宵丽等也以中华獗猴桃伏牛95-2叶片为试验材料，对不同侵染方

7、式、预培养时间等影响b-葡萄糖昔酸酶基因瞬时表达率的因索进行了研究。侵染时间和共培养时间是整个遗传转化中最重要的因素，因为农杆菌的附着、T-DNA的转移整合都在这个时期完成，太长难以脱菌，太短乂不能使菌液和外植体伤口表面充分接触，从而使T-DNA进入体内。3.2受体系统獗猴桃主要以叶片或叶圆盘为受体。在获得的獗猴桃转棊因植株屮，有美味獗猴桃、中华獗猴桃和阔叶獗猴桃。1995年何子灿筹研究了美味獗猴桃叶愈伤纽织原生质体再生植株和母株茎尖体细胞染色体数目。1996年，张远记等从软枣獗猴桃试管苗茎段和叶片诱导出愈伤组织并得到再牛植株。1997年，邱南新以中华獗猴桃外植