植物病原线虫实验指导

《植物病原线虫实验指导》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、植物病原线虫学实验指导（植物保护、动植物检疫专业用）农业大学植物保护学院植物病理系实验一植物病原线虫的分离（3学时）一、目的要求了解从土壤和植物组织中分离线虫的基木原理，掌握从土壤和植物组织中分离线虫的常用方法。学习在解剖镜或扩大镜下用银了、竹针、毛针、毛笔等工具从水中和滤纸上挑取线虫的方法。二、基本原理植物寄生线虫主要存在于土壤和植物组织中，分离线虫的方法有许多，要根据线虫的种类、研究目的等来选择适宜的方法。植物寄生线虫的个体很小，除极少数可从植物组织中直接挑出以外，绝大多数需借助特定的工具和方法才能完成。线虫的分离主要

2、是利用它的趋水性、大小、比重以及与其他杂质的差异，采用过筛、离心、漂浮等措施，将线虫从植物组织、土壤中分离出來。三、材料、试剂与仪器1.实验材料感染廿薯茎线虫的病薯块、感染根结线虫病的植物病根、病土，感染大豆砲囊线虫或其它砲囊线虫的病土等。2.仪器或实验用具显微镜、漏斗分离装置、漂浮分离装置、浅盘分离装置、纱布、记数皿或平皿、小烧杯、小玻管、40目和400目网筛、餐山纸、挑针等。四、实验操作1.直接解剖分离对于个体较大的线虫如根结线虫、砲囊线虫、粒线山的雌虫等，可直接用挑针从植物组织屮挑取，也可在解剖镜或扩大镜观察下直接挑

3、取，对于虫体稍小的线虫如茎线虫、粒线虫的雄虫和幼虫等，需在解剖镜下，用竹针或毛针直接挑取。取感染根结线虫的植物病根材料（若是干材料需用水浸泡过夜），用解剖针撕破皮层，观察里而是否有针头大小、乳白色发亮的颗粒状物，用挑针挑取，置凹玻片上水滴小，有时线虫游离水屮，可用挑线山的细挑针或毛细吸管吸取线山，用软蹑子拾取线虫和胞囊。在解剖镜或显微镜下观察是否为根结线虫雌虫。2.漏斗分离法该方法操作简单，是目前从植物材料中分离线虫较好的方法。其装置是将直径10〜15cm的玻璃漏斗架在铁架上，下面接一段约10cm的橡皮管，橡皮管上装一个弹

4、簧夹。（1）将植物材料切碎用双层纱布包好，浸在盛满清水的漏斗中，或在漏斗内衬放一个用细铜纱制成的漏斗状网筛，将植物材料直接放在网筛中，分离土壤线虫时需在网筛上放一层纱布或多孔疏松的纸，上面加一层土样。(2)加水，静置1ho提示：由于趋水性和自身的重量，线虫就离开植物组织或土壤，沉降到漏斗底部的橡皮管中。(3)打开弹簧夹，慢慢放出底部约5mL水样于平皿内。(4)在解剖镜下观察分离到的线虫。若线虫数量太少，可将水样倒入离心管中，在1500rpm离心机中离心3min,倒掉上层清水，将下层沉淀物悬浮后倒入平皿或记数皿中，在显微镜下

5、观察记数，然后将线虫用毛针或毛笔挑入盛有固定液的小玻璃管中备用。提示：该方法也可用于分离土壤中的线虫，尤其是分离较为活跃的线虫。1.培育分离法对于用漏斗分离法不易分离到的线虫，如根结线山和抱囊线山的雄性成虫等，可采用培育分离法。将病根釆回后洗去表而土粒，放在培养皿中湿润的滤纸上培育3d,用少量清水冲洗组织和皿底，检查水屮线虫。或将组织放在有螺旋盖的玻瓶小，加入几毫升清水，盖不要旋紧，在室温(20〜25°C)下培育3d,然后加5()mL清水，盖紧盖子并轻轻振荡,后倒出悬浮液使其顺序通过40口和400口网筛，用小水流轻轻冲洗4

6、00口网筛背而，收集到记数皿或烧杯中，直接检查或离心后检查。提示：从土壤小得到病根后要马上冲洗和培育，因为24h后，有50%的线虫会从根里爬出，冲洗时便被冲掉了。2.浅盘分离法该方法原理与漏斗分离法一样，但分离效果更好，而且泥沙等杂物较少。用两个不锈钢浅盘套放在一起，上面一个是筛盘，它的底部是筛网，网目大小为10目/英寸，下面一个是稍大的盛水盘。也可在培养皿上放置一个稍小的做成浅盘状的金属网，网与培养皿底部保持一定距离。分离时将线虫滤纸放在网上用水淋湿，上面再放一层餐山纸，将要分离的土样或植物材料放在餐巾纸上，在两盘Z间缝

7、隙中加水，淹没土样或植物材料，在室温(20〜25°C)下保持3d,去掉筛网后，将下面浅盘中的水样过筛(上层为25目，下层为400g),将下层筛上的线虫用小水流冲洗到记数皿中，观察记数。五、实验作业记录实验过程，对分离到的线虫进行计数；比较各种线虫分离方法的优缺点。实验二几种主要植物病原线虫的形态观察(3学时)一、目的要求识别主要植物线虫病的症状和病原线虫的形态特征。包括雌雄同型及异型线虫。注意观察头部的口针、食道(屮食道球和背食道腺)、肠、雄虫尾部的交合刺、交合伞及雌虫阴门和肛门等。二、材料和用具小麦粒线虫(Anguina

8、tritici)；甘薯茎线虫病薯(.Ditylenchusdestructor｝；花生根结线虫(Meleidogyneawnaria),寄主花生等；人豆胞囊线虫(H&eFodbaglycines)。线虫的固定液：福尔马林固定液(2〜4%的甲醛)。双目解剖镜、显微镜、载玻片、盖玻片、筛子、竹挑针、单面刀片