园艺植物离体培养实验指导书

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1、园艺植物离体培养学实验指导书适用专业园艺教师XXX园艺园林学院2005年3月目录实验一组织培养室的建设规划实验二母液及培养基的制备实验三器官瞬：术实验四诱导生根及植株再生实验五再生植株的移植实验一组织培养室的建设规划植物组织培养是在严格的无菌条件下离体培养植物材料。要达到无菌离体培养就需要一定的设备、器材和用具，同时还要人工控制温度、光照等培养条件。而这些工作的完成是在特定的实验室里进行的。下而讲到的实验室也并非全部都具备才能述行工作，这要根据具体任务和当地条件而定。%1.化学实验室贮备组织培养所用药品和配制培养基的

2、场所。实验室应具备实验室、•药品柜、用具柜等基本设施；应备有盛培养基的试管、三角瓶等容器；加样、贮液、定容所用用具和容器;还应有蒸懾器、冰箱等。%1.无菌室无菌室是进行植物材料的消毒、分切、接种和培养转移的操作场所。无菌室应达到如下要求：1.室内密闭，女装移动门，使空气不致流动，面积一燉5〜6*即可2.墙地光滑平幣，便于清洁工作；3.安装紫外灯，以便灭菌；4.室内有光滑平整的操作台；5.无菌室外应设置预备室，作为缓冲问，以避免进出时带进杂菌；6.也可用超净工作台代替无菌室，即可在淸洁卫生的专用室内安放超净工作台，因超

3、净工作台内的空气是经过过滤除菌的，所以台内小环境是无菌的。%1.培养室培养室是将接种到容器中的培养材料进行培养牛长的场所。培养室应达到如下要求：1.培养室空间不宜过人，一般而积为10〜1211?,内空高度2.3〜2.5m为宜，室顶和周围墙瞬要求有隔热、防火性能。2.应具备培养架，木制和铝合金框架安装玻璃板均可，但木制架应刷防火涂料。架高一•般1.7〜2叫架高35〜40cm,架长根据培养室的大小利工作者的需要而定。一个培养架可做成儿层，一般每层间隔35〜40cm即可。在培养架上安装日光灯，一般每层60〜80w。3.培养

4、室应保持在20〜27°C左右，可用空调，电炉（接上控温仪）、石英管加热器等设备来解决。1.应有控制光照时间的设沌，一般可采用女装时间继电器或英片定时开关钟來自动控制照明时间。2.培养室应保持整洁，切忌堆放无关物品。根据需要还可放置摇床等各种培养装置。%1.灭菌室灭菌室是对无菌操作之用的玻璃器皿、小用具、无菌滤纸，无菌-水和培养基进行灭菌消毒的场所。玻璃器皿和小用具可采川于热灭菌法，即在烘箱内150°C约保持1小时。培养基、无菌水和无菌滤纸则一般采川高压蒸汽灭苗法，H在高压消毒釜内121°C,保持15〜18分钟便可达到

5、灭菌的目的。要求灭菌室除有灭菌的烘箱，高压锅外，还要有水源、电源。建筑上要求耐湿耐高温和具有消防设施。%1.细胞学实验室细胞学实验室是观察培养物牛长情况，细胞组织结构，器官发牛粧体、细胞变异情况等的场所。实验室要有固定平整，光滑的水磨石台板，放置生物显微镜，解剖镜和倒置显微镜等显微观察所必需的仪器。%1.暗室暗室是洗、印观察培养物所扪照片的场所。要求暗室内有一套冲洗，印相，放人等设备，以便及时见到结果。暗室内需有放大机、晒箱、上光机等设备，有固定的水泥工作台板，还要有电源和自来水装置。实验二母液及培养基的制备培养基是

6、离体植物材料细胞分裂、组织分化和形态建成所需各种物质成分的來源,依据研究目的的不同应选择合适的基木培养基，同时要考虑加入恰当种类和浓度的植物生长调节物质。但山于基本培养基所包括的物质的种类较多，而且微量元素、一些微生素和植物激素的川量极少，如果每次配制培养基均全部称量则既增加工作量乂可能因为称量太少而加大称量的误差，所以在组织培养室里随时准备好所需用的基本培养基1111母液，配制培养皐时只要按应取的量加入即可。植物激素不是皐木培养皋包括的成分，而是根据研究的需要而加入一定的量。按照植物激素的常川量配制成恰当的浓度使川

7、起来就比较方便。母液的制备1.制备母液的原则（1）配制母液时特别要注意无机成分在-•起时可能产生的化学反应，如c/和SOF,Ca2和P0广一起溶解后，会产牛沉淀，不能作为一个母液配制；（2）制备母液时要用重蒸馅水;（3）药品质量应符合要求，称量要准确；（4）扩大称量的倍数要恰当，一般为10〜100倍；（5）制备好的母液瓶上应分别准确地贴上标签，注明焰何种基本培养基、母液号，配制1000毫升培养基应取的量以及制备H期。以MS（1962）基本培养基为例，根据各种药品的特点，可按下述方法配制：母液号1药品名称NH4NO3

8、MgSO4•7H2Okno3称量(g)82.51&595.0定容量（ml）1000取量(ml/lOOOml培养基)202CaCl2*2H2O22.0500103kh2po48.5500104Na^-EDTA3.73FcSO4-7H2O2.78100010H3BO30.620ZnSO4•7H2O0.860NaMyO4-2H2O0.01255CoC