植物离体培养体系建立

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1、第三节植物离体培养体系的建立一、植物组织培养的阶段划分：通常将组织培养过程划分为四个阶段1、起始培养阶段（诱导阶段）2、增殖培养阶段3、生根培养阶段4、驯化移栽Stage0–Selection&preparationofthemotherplantsterilizationoftheplanttissuetakesplaceStageI-InitiationofcultureexplantplacedintogrowthmediaStageII-Multiplicationexplanttransferredtosho

2、otmedia;shootscanbeconstantlydividedStageIII-RootingexplanttransferredtorootmediaStageIV-Transfertosoilexplantreturnedtosoil;hardenedoffStepsofMicropropagation二、外植体起始培养（无菌体系建立）起始培养阶段是指无菌体系的诱导和建立过程。主要受外植体、培养基、环境条件等因素的影响。（一）外植体的起始培养过程1、起始培养的一般过程：A、选取适宜的基因型（品种）；B、选

3、取适宜的外植体；常用外植体有茎尖、茎段、节间、叶片、叶柄等。C、流水冲洗外植体；D、外植体切割、分离及灭菌处理；E、外植体接种于诱导培养基。F、环境条件控制促进外植体的生长。2、接种外植体的生长过程：A细胞分裂的启动；B细胞增殖；C组织和器官的形成。（二）影响外植体起始培养的因素：1、影响外植体起始的因素A外植体的遗传基础及生理影响B培养基组成成分：矿物盐类、微量有机成分、生长调节物质、碳源、琼脂、活性炭、酚类化合物、多胺等。C培养条件：光照、温度、湿度A外植体(1)外植体种类及基因型(2)外植体供体植株和外植体的来源

4、与生理状态(3)外植体大小(4)外植体的极性外植体种类及基因型单子叶植物不易诱导器官发生。b.木本植物较难诱导。c.存在基因型差异（如番茄29%~63%）d.开始生长季节取材容易诱导。外植体状态：外植体大小：外植体越小成苗能力越弱，较大的外植体增殖较快。外植体极性：当外植体以形态学的基部接种于培养基上时，从远离基部的表面诱导出芽、苗数目较多。B、培养基a培养基类型:b碳源的影响:C、植物生长调节物质a细胞分裂素和生长素类b赤霉素类c乙烯及其生物合成抑制剂d其他有机化合物细胞分裂素和生长素：a.部分植物单独使用细胞分裂素

5、（CTK）可以形成无根苗b.部分植物无根苗的形成需要细胞分裂素和生长素配合使用。c.外源CTK与生长素必须维持适当比例以改变内源激素平衡，促进器官发生。d.不同细胞分裂素对分化的作用效果不同e.苯基脲衍生物具有较高的细胞分裂素活性（4PU、CPPU、TDZ）赤霉素类：赤霉素与促进细胞伸长和开花反应，组织培养条件下只在少数植物上对芽的诱导有促进作用。如马铃薯、甜菜、樱桃等。乙烯及其生物合成抑制剂：具有促进和抑制两方面的影响，但抑制作用多于促进作用。因此在某些植物种类，乙烯抑制剂可以促进芽的形成。AgNO3、CoCl、AV

6、G其他有机化合物：腺嘌呤衍生物具有促进器官分化作用。椰子汁等物质也具有促进分化的功能。3.培养条件及其他因素（1）光照通常1000~5000Lx16小时光照。非洲菊1000lx，洋葱16小时，马铃薯连续光照，葡萄要求短日照。光质也影响芽的再生，蓝光有利于器官发生，烟草实验，而红光有利于根的发生。（2）温度大部分植物要求25oC，少数要求较低温度（15~20oC）或较高的温度（30oC）如菖蒲、水仙、洋葱、龟背竹等。变温处理对有些植物器官发生有促进作用，如豌豆。（3）湿度：培养室相对湿度以70％－80％为适宜，培养容器内

7、要保持适宜湿度，防止过于干燥或湿度过大。（4）气体：要注意保持培养容器内良好的通气性。维持适宜的氧气和二氧化碳浓度，防止有害气体的积累。如何进行外植体的起始培养（无菌体系的建立）？1、选择适宜的外植体；2、选择适宜的培养基；3、创造适宜的环境条件20050926