新乡医学院法医物证实验指导-3

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1、第三部分ABO血型检验(testforABObloodtype)实验十抗A、抗B、抗H抗体的效价测定及标化(thedetectionandstandardizationofanti-A,-B,-H)［目的和要求］掌握红细胞混悬液的制备；抗A、抗B、抗H抗体的效价测定及标化。［原理］抗A抗体能凝集A型红细胞，抗B抗体能凝集B型红细胞，抗H抗体能凝集0型红细胞。分别将抗A、抗B、抗H抗体用生理盐水按倍量稀释法稀释(2、4、8、16……倍)，然后分别加入相应的红细胞。能使红细胞凝集的抗体最高稀释倍数即为该抗体的效价。［

2、实验仪器与试剂］1.仪器设备凹玻片、试管架、试管、滴管2•试剂抗A、抗B、抗II抗体、各型红细胞、生理盐水［操作方法］一、红细胞混悬液的制备取血液数滴滴入小试管内，加入多量生理盐水，混匀后置离心机内离心，4000转/分钟，1min,取出，弃去上清液。再加人多量生理盐水，混匀，再离心1min,弃去上清液，留下管内的压积红细胞备用。1.50%红细胞悬液制备：取压积红细胞1份，加住理盐水1份即成。2.5%红细胞悬液制备：取压积红细胞1份，加生理盐水19份即成。1.2%红细胞悬液制备：取5%红细胞悬液2份，加人生理盐水3

3、份即成。二、效价测定取12凹的白瓷板三块,分别标明“抗A”、“抗B”、“抗H”字样,每凹加入生理盐水2滴，分别于第一凹内加抗A、抗B抗体2滴（标明“抗A”字样的口瓷板加抗A抗体；标明抗B抗体字样的白瓷板加抗B抗体），混匀，吸2滴至第二凹，同样的方法操作，直至笫V•—凹，多余的2滴弄去。如此，抗A、抗B、抗II抗体被依次稀释为2、4、8、16、32、64、128、256、512、1024、2048倍。于每凹中加入相应的2%红细胞悬液1滴，摇匀，30minZ内观察红细胞凝集。能使红细胞凝集的抗体最高稀释倍数即为该抗体

4、的效价。若抗体的效价为128时，要将之效价标化为16,则16/128=1/8,即1份抗体,7份生理盐水混匀即成。其它以此类推。［注意事项］1•加牛理盐水、抗体、及稀释抗体的整个过程，均用同一支毛细滴管。1.手持毛细吸管的倾斜度应一致。1.应尽量避免混匀液体时产生大量气泡。［思考题］1.为何进行抗体效价的测定？实验计新鲜血液ABO血型检测（testforABObloodtypeoffreshblood）［目的和要求］掌握新鲜血液的ABO血型检测。源理］利用抗A和抗B抗体与红细胞上抗原（凝集原）的凝集现象，以鉴别AB

5、0系统血型的A、B、0、AB四型。或用已知的A型.B型红细胞检测血清中的未知抗体（凝集素），视血清中有无抗A、抗B凝集素來推定被检血的ABlfll.型（注：特殊血型如孟买型例外）。［实验仪器与试剂］1.仪器设备：试管、试管架、凹玻片、普通离心机、记号笔、滴管2.试剂已知标椎抗-A与抗-B血清、已知2-4%A型与B型红细胞生理盐水悬液生理盐水：0.85%NaCl溶液。［操作方法］1•凝集原测定一瓷板法（1）取瓷板一块（或用玻片），在瓷板的两凹窝（如用玻片，则用蜡笔将玻片划分为两格）上分别标明“抗A”、抗B”字样。（

6、2）于“抗A”凹滴入抗A血清1滴，“抗B”凹滴抗B血清1滴。（3）两凹各加人2%被检人红细胞混悬液1滴。（4）将瓷板前后左右倾斜旋转，轻轻振摇，使凹内红细胞与抗血清混匀（或用玻棒轻轻搅拌，使其混匀）。（5）室温放置5min后，拿起瓷板，转动数次。肉眼观察，在15min内红细胞有否出现凝集（颗粒状或块状凝集）。1.凝集原测定一试管法：（1）取小试管两支，分别标上“抗A”、“抗B”字样。“抗A”管加抗A血清1滴、“抗管加抗B血清1滴。（2）向管内加入2%红细胞混悬液1滴。（3）摇匀后，将试管置离心机离心1mindOO

7、O转/分），取出试管后，轻轻摇起沉淀物，在良好光源下观察结果，结果判定同瓷板法。1.凝集素测定（瓷板法与试管法）原理和检测方法与凝集原测定相同。只不过凝集原测定用已知的抗A、抗B血清检测未知血型的红细胞，而凝集素测定则是用已知的A型和B型红细胞来检测血清屮的凝集素（可抽取被检者血液0.3ml,放于试管内让其凝固，待血清析出后，取血清分别与A、B型红细胞混合后，观察凝集反应）可根据检出凝集素（抗A、抗B）有无来推定被检血液的血烈。［结果］根据红细胞与抗A、抗B或被检血清与已知A型、B型红细胞的凝集悄况，即可判定AB

8、O血型，如下表：抗A血清抗B血清A+—B—+0*——AB1十注：“+”为凝集，“一”为不凝集。判定凝集强弱标准：++++：呈一个人凝集块，几乎没有游离的红细胞。+++：凝集块稍小，冇少量游离的红细胞。++：凝集块更小，游离的红细胞约占1/2。+：呈细小的凝块（凝集颗粒），游离的红细胞更多。*：此结果与孟实型的一•致。若需证实，则需加抗H血清检验，如与抗H血清的凝集反应仍为