微生物综合实验指导书

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1、食品微生物实验指导书（II）上海理工大学食晶与生物技术研究所2010年9月一.拟利用本实验室设备的名称及试剂需要（应列出拟利用的设备和试剂。这些设备是否具有？这些设备的性能和操作步骤是否了解？所需试剂实验室是否已有？如果购买，应事先与老师商定。如果设备及试剂不具备，则本次实验设计将无法完成。）五.审批意见教师姓名年月曰学生签名年月曰四.考核方法与要求（一）基础性实验部分1.平吋成绩：包括出勤、实验操作，实验效果、讨论情况等，占30%2.报告成绩：实验报告等，占30%3.考试成绩：占40%4.综合考核成绩：平时成绩+设计成绩+报告成绩（二）综合性实验部分1.平时成绩：包括出勤、实验操作，实验效

2、果、讨论情况等，占30%2.设计成绩:提交实验设计报告等,占30%3.报告成绩：实验报告和实验产物等，占40%4.综合考核成绩：平时成绩+设计成绩+报告成绩（三）研究性实验部分1.选做该类实验的同学可不选综合性实验项1=1,成绩评定参照综合性实验部分。2.实验报告要求以论文形式撰写。第二部分应用片生实验部分实验18酒精发酵及糯米甜酒的酿制一、实验目的和内容目的：学习和掌握酵母茵发酵糖产生酒粘和酒曲发酵耦米酿制糯米甜酒的方法。内容：1.酵母菌的酒精发酵。2.糯米甜酒的酿制。二、实验材料和用具培养24h的酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）斜而菌种。酒精发酵培养基、甜酒曲、

3、熬绸水、无菌水、糯米。铝锅、电炉、三角瓶、牛皮纸、棉绳、蒸饰装置、水浴锅、振荡器、酒精比重计。三、操作步骤（一）酵母菌的酒精发酵1.培养基配制好的发酵培养基分装入300mL三角瓶中，每瓶100mL,121°C湿热灭菌20-3Omin。2.接种和培养于培养24h的酿酒酵母斜面屮加入无菌水5mL,制成菌悬液。并吸取ImL接种于装有100mL培养基的三角瓶中，一共接2瓶，其中I瓶于30°C恒温静止培养，另1瓶置30C恒温振荡培养。3.酵母菌数目的计数每隔24h収样，经10倍稀释后进行细胞计数（方法参阅“细菌数量测定”）。4.酒楮蒸憎及酒楮度的测定取60mLQ发酵培养3d的发酵液加至蒸谓装置的圆底烧

4、瓶中，在水浴锅中85—95°C下蒸谓。当开始流出液体时，淮确收集40mL于量筒中，用酒精比重计测量酒精度。5.品尝取少量一定浓度（30—40度）的酒品尝，体会口感。（二）糯米甜酒的酿制1.甜酒培养基制作称取一定量优质糯米（糙糯米更好）。川水淘洗干净后，加水暈为米水比1：h加热煮熟成饭。或者襦米洗净后，川水浸透，沥干水后.加热蒸熟成饭，即为甜酒培养基。2接种糯米冷却至35°C以下，加入适量的甜酒曲（用量按产品说明书）并喷洒一些淸水拌匀，然后装人到干净的三角瓶中或装入聚丙烯袋屮。装饭量为容器的1/3-2/3,屮央挖洞，饭面上再撒一些酒曲，塞上棉塞或扎好袋口，置25—30°C下培养发酵。3.培养发

5、酵发酵2d便可闻到酒香味，开始渗出清液，3-4(1渗出液越来越多，此吋，把洞填平，60淮阴师范学院生物实验中心让其继续发酵。1.产品处理培养发酵至第7天取出，把酒糟滤去，汁液即为糯米甜酒原液，加入一定暈的水加热煮沸便是糯米甜酒，即可品尝。四、注意事项酿制糯米甜酒时糯米饭-•定要煮熟煮透，不能太硬或夹生；米饭一•定要凉适至35°C拌酒曲，否则会影响正常发酵。五、演示酒精義懈过程六、实验报告1.记录酵母酒精发酵过程，比鮫两种培养方法结果的不同，并解释其原因。2.记录糯米酿制糯米甜酒的发酵过程，以及糯米甜润的外观、色、香、味和口感。七、问题和思考1、为什么糯米饭温度必须降到35°C下拌酒曲，发酵才

6、能正常进行？糯米饭一开始发酵时要挖个洞，后来乂填平，为什么？2、酒精发酵培养基配方中如去掉KHPOliFL，同样接入酒精酵母菌进行发酵，将出现何种结24果?为什么？参考书H钱存柔，童碧虹.微牛物学基础知识与实验指导北京；科学出版社，1979实验19抗生素抗菌谱及抗牛菌的抗药性测定一、实验目的和内容目的：学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生索的抗菌谱。内容：1.供试菌的培养与制备。2.抗生索抗菌谱的测定。二、实验材料和用具金黄色葡萄球菌（Staphylocuccusaureus）＞大肠杆菌（E.co"）斜面菌种（野生株及不同抗药程度的抗链霉素菌株3株）。牛肉膏蛋白月东培养基斜而。供试抗生素

7、：氨节青霉素、氯霉素、卡那霉素、链霉素和四环素。恒温培养箱、银子、圆滤纸片（直径为8・5mm）或牛律杯、培养皿（直径12cm）。三、操作步骤（一）供试菌的培养基制备金黄色葡•萄球菌（代表革兰氏阳性菌）和大肠杆菌（代表革兰氏阴性菌）接种在牛肉膏蛋白腺琼脂斜面上，置37°C下培养18—24h,取出后用5mL无菌水洗下，使成菌悬液备用。（二）配制所需浓度的抗生素各抗生素分别配制成以下浓度：氨节青WMlOOug/mL