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1、海藻学实验指导温州医学院生命科学学院海洋系2009年5月实验一藻类细胞的观察和计数一、实验目的1.了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能；2.观察常见藻类细胞形态结构。二、实验原理测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的冇显微直接计数法和平板计数法。显微计数法适用于各种含单细胞藻的纯培养悬浮液。血球计数板是-•块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间乂被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小
2、方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格Z间用双线分开），而每个大方格乂分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都曲400个小方格组成。计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mn?,每个小方格的面积为l/400mm2o盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3o使用血球计数板计数吋，先耍测定每个小方格中藻细胞的数量，再换算成每毫升藻液屮细胞的数量。1mm3体积应含冇小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4x106个小方格,K=4xl06o
3、每ml菌液屮含冇细胞数二每个小格中细胞平均数（N）x系数（K）X菌液稀释倍数（d）三、方法与步骤1、取洁净的血球计数板，在计数室上而盖上盖玻片。2、取稀释到一定程度藻液，从盖片边缘滴一小滴，使藻液口行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。3、如用16X25计数板,只计四个角上中方格的菌数。若是25X16的计数板,除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数旷3次。计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4、位于格线上的藻细胞一般只计此格的上方线及左方线上的菌体。5、计数方法:样品屮菌数/
4、ml二每小格平均菌数x4000,OOOx稀释倍数，本实验采用25x16规格,要求数这些方格中的全部小格即80个小格。设：每个中方格的菌数为A,则每小格平均菌数二（Al+A2+A3+A4+A5）/80样品中的菌数/ml二（A1+A2+A3+A4+A5）/80X4000,000X稀释倍数结果记录第一个第二个第三个第四个第五个中格中格中格屮格中格第一次测定笫二次测定平均四、测定注意事项：1、测定时，藻液要要摇匀，防止细胞沉淀。2、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线上的藻细胞。五、思考题1,采用血球计数板的计数是，如何减少误差？附：鲁格氏碘液：碘lg,碘
5、化钾2g,蒸憾水300mLo先将碘化钾溶于3〜5ml蒸留水中，然后加碘，摇匀，使碘完全溶解后，再加蒸镭水至足量。装入棕色试剂瓶。实验二藻细胞大小的测定一、实验目的了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造和使用原理，掌握微生物细胞大小的测定方法。二、基本原理微生物细胞大小，是微生物的形态特征之一，也是分类鉴定的依据Z-O由于菌体很小,只能在显微镜下测量。用来测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺是屮央部分刻冇精确等分线的载玻片。一般将1mm等分为100格（或2mm等分为200格），每格长度等于0.01mm（即106nm）o是专用于校正目镜测微尺每
6、格长度的。有等分50小格或100小格两种,每5小格间有一长线相隔。由于所用接目镜放目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度，大倍数和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也就不同，因此，口镜测微尺不能直接用来测量微生物的大小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一-定放人倍数的接目镜和接物镜下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才可用来测量微生物的大小。三材料3.1器械显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺，载玻片、盖玻片、血球计算板、擦镜纸、吸水纸、玻片架、洗瓶、滴管。3.2藻种培养至对数生长期的藻细胞。四流程4.
7、1置目测微计一＞置台测微计一＞标定目测微计-测细胞大小―记录结果一＞用毕擦拭干净4.2检查计数板T稀释样甜T加样T计数T计算T清洗五步骤1口镜测微尺的校正：更换口镜测微尺镜头（标记为PF）；或者取下口镜上部或下部的透镜，在光圈的位置上安上目镜测微尺，刻度朝下，再装上透镜，制成一个目镜测微尺的镜头。2某一倍率下标定目镜刻度：将镜台测微尺置于载物台上，使刻度面朝上，先用低倍镜对准焦距、看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器使两尺重叠，并使二尺的左边的某一刻度相重合,向右寻找另外二尺相重合的刻度。记录两重叠刻度间的冃镜测微
8、尺的格数和镜台测微尺的格数。3计算该倍率下口镜刻度：
