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1、孕期人乳头状瘤病毒亚临床感染与母婴垂直军医进修学院学报2000年第21卷第1期彭萍翁霞云谷志远李琦摘要：日的：探讨不同孕期人乳头状瘤病毒(HPV)亚临床感染及母婴垂直传播情况。方法：采用PCR技术检测30例孕早期、42例孕中期、32例孕晚期妇女的宫颈分泌物、母血、绒毛或胎盘、羊水、脐血及新生儿咽部抽吸物标本HPV-6、11、16、18型DNAo结果：早孕期：5例宫颈分泌物HPV阳性(5/30),7例母血HPV阳性(7/30),3例绒毛HPV阳性(3/30)；中孕期：12例宫颈分泌物HPV阳性(12/42),11例母血HPV阳性
2、(11/42),9例胎盘HPV阳性(9/42)；另22例羊水标本中，仅1例HPV阳性(1/22)；晚孕期:23例宫颈分泌物HPV阳性(23/32)、18例母血HPV阳性(18/32),12例胎盘HPV阳性(12/32)；另31例羊水标本中，4例HPV阳性(4/31),31例脐血标本中，12例HPV阳性(12/31)o分析羊水、脐血与母血HPV感染的相对危险度高于宫颈分泌物，而产时新生儿咽部抽吸物与宫颈分泌物HPV感染的相对危险度高于母血。结论：在整个孕期中，孕晚期的HPV亚临床感染明显。孕期HPV亚临床感染的母婴传播不但可经产
3、道直接接触传播，述可经羊水、胎盘发生宫内传播，其宫内传播率的高低主要与母血IIPV感染相关。新生儿脐血的I1PV感染主要与母血感染相关，而产时新生儿咽部的HPV感染主要与宫颈分泌物感染相关。关键词：人乳头状瘤病毒；妊娠；传播；PCR近年来，女性生殖道人乳头状瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）感染率逐年上升，而其引起的尖锐湿疣已成为最常见的性传播疾病之一。孕期妇女HPV感染可通过母婴传播引起婴幼儿肛生殖部位的先天性尖锐湿疣、青少年喉乳头状瘤等相关性疾病，因而倍受关注，相继有学者对HPV的母婴传播作了初步探讨
4、；但多限于孕晚期的研究，且取样单一，欠全面。我们选取平均年龄相近的孕早、中、晚期妇女共104例，采用PCR技术，对其宫颈分泌物、母血、绒毛或胎盘组织、羊水、脐血、新生儿咽部抽吸物标本进行HPV-6、11、16、18型DNA检测，力求对HPV的母婴垂直传播进行系统观察，现将结果报告如下。1对象和方法1.1实验对象1997年5月〜1997年11月期间，按来院就诊日期随机选取孕早期30例（6〜11周）、孕中期42例（12〜27周）、孕晚期32例（28〜41周）,排除有内外科疾病、外阴瘙痒及白带常规检查异常者。1.2临床标本的采集包括
5、：①冲洗宫颈外口(孕晚期者于破膜前)，留取冲洗液；产时吸取咽部分泌物；取羊水(孕中期志愿做雷凡诺尔引产者经腹行羊膜腔穿刺，孕晚期经阴道分娩者丁人工破膜前穿刺前羊水囊、剖宫产者于术中取)，三种标本4°C下低速离心收取细胞沉淀，混悬于1.OmlPBS液中；②取孕早期绒毛，孕中、晚期胎盘，用生理盐水反复漂洗，直至确认无母血污染；③孕晚期娩出儿，确认无母血污染，抽取脐血，肝素抗凝;④抽取孕妇外周血，肝素抗凝。上述标本均置-20°C冰箱保存。1.3DNA提取1.3.1宫颈冲洗液、新生儿咽部抽吸物及羊水标本用50〜100111裂解液(蛋白
6、酶K终浓度为100iig/m1)混悬细胞沉淀，于55°C水浴消化lh；95°C处理lOmin,4°C下11000r/min离心5min,取上清液做为PCR扩增的模板。1.3.2全血标本先反复用TE液除去红细胞成分，余同3.1步骤。绒毛及胎盘组织组织块经lmlDNA提取液(10mmol/LTris-HCl,0.lmol/LEDTA,0.5%SDS,100pg/ml蛋白酶K)匀浆处理后，55°C水浴4h,苯酚：氯仿：异戊醇(25:25:1)抽提2次，加入1/10体积3molNaAc(pH5.2)和2倍体积的无水乙醇沉淀DNA。1.
7、4PCR扩增引物设计、扩增程序、扩增产物见参考文献［1］。每次扩增均同时设阳性和阴性对照，阳性对照为解放军总医院分子生物实验室提取的IIPV-6、HPV-lkHPV-16、HPV-18型质粒DNA,阴性对照为蒸憾水。经2%琼脂糖凝胶电泳判定结果。1.5资料的统计学处理应用SAS软件，计数资料比较采用x2检验，如频数有特别小值吋，两组采用Fisher精确检验,多组采用似然比x2检验。单因数的相关分析采用队列研究分析,多因数的相关分析采用Logistic多元回归分析。以P<0.05为显著性界值。2结果1孕期妇女HPV亚临床感染孕早
8、、中、晚期妇女宫颈分泌物及母血的HPV感染率分别为16.67%(5/30)、23.33(7/30)；28.57%(12/42)、26.19%(11/42)；71.86%(23/32)、56.25%(18/32)；经总x2检验，差异均有极显著意义(x2宫颈=22.844,x2母
