中药化学实验指导—实验一大黄中游离蒽醌的提取分离与检识

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1、中药化学实验指导一实验一大黄中游离蔥醍的提取分离与检识实验一大黄中游离恿醍的提取分离与检识（一）目的要求学习轻基恿醞类化合物的提取分离和检识，通过实验要求：1.掌握从大黄屮提取和分离游离恿:醍的方法。2.掌握用pH梯度萃取法分离不同酸性的疑基恿醍类化介物。3.掌握恵醍类化合物的主耍检识方法。4.熟悉恵醍类化合物的色谱检识方法。5.了解用柱色谱法分离葱酿类成分。（二）主要化学成分的结构及性质人黄为蓼科植物掌叶人黄RheumpalmatumL.、唐古特人黄RheumtanguticumMaxim,exReg.和药用大黄Rheumofficinale

2、Baill.的干燥根及根茎。大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲瞇及其背，总含量约3%〜5%。1.人黄酸分子式C15H8O6,分子量284.21。黄色针状结晶（升华法），mp.321〜322°C,330°C分解。能溶于碱水、毗睫,略溶于乙醇、苯、氯仿、乙醯和石油醛，几不溶于水。2.人黄索分子式C15H1005,分子量270.23。橙色针状结晶（乙醇），mp.256〜257°C,能升华。易溶于乙醇、碱水，微溶于乙瞇、氯仿，几不溶于水。3.芦荟大黄素分子式C16H1005,分子量270.230橙色针状结晶（甲苯），mp.223〜2

3、24°C。易溶于热乙醇，可溶于乙醯和苯，并呈黄色；溶于碱液呈红色；氨水及硫酸屮呈绯红色。4.大黄酚分了式C15II1004,分了量254.23o橙黄色六方形或单斜结晶（乙醇或苯），mp.196〜197°C,能升华。易溶于沸乙醉，可溶于丙酮、氯仿、苯、乙瞇和冰醋酸，极微溶于石油醯、冷乙醉，儿不溶于水。1.大黄素甲瞇分子式C16II1205,分子量284.26。砖红色单斜针状结晶,mp.203〜207°C,溶于苯、氯仿、毗I定及甲苯，微溶于醋酸及醋酸乙酯，不溶于甲醇、乙醇、乙讎和内酮。0H00H大黄酚R1=CH3R2二H大黄素R1二CH3R2=OH

4、人黄酸R1二C00HR2二H大黄素甲醸R1=CH3R2=0CH3R2ORl（三）实验原理本实验是根据人黄中的疑基恵服廿经酸水解成游离轻基蔥醜，而游离轻基恵醜不溶于水，可溶于氯仿、乙讎等亲脂性冇机溶剂的性质，用氯仿从水解液中将游离疑基蔥酿捉取出来，再利用各游离经基恵酿的酸性不同，采用pH梯度萃取法将其分离。其中大黄酚和大黃素甲醯的酸性I•分近似，用PII梯度萃取法难以分离，町利川两者的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。（四）实验内容1.提取与分离见书。2.检识（1）碱液试验分别取各恿覘化合物结晶少许，置试管中，加Ind乙醇溶解，加数滴10%氢氧

5、化钠试剂振摇，观察颜色变化，轻基恵呢应显红色。（2）醋酸镁试验分别取各蔥酿化合物结晶少许,置试管中,加lml乙醇溶解，加数滴0.5%醋酸镁乙醇试剂，观察颜色变化，轻基恵酿应显橙、红、紫等颜色。（3）薄层色谱检识薄层板：硅胶G-CMC-Na试样：自制大黄酸、大黄素、芦荟大黄素的氯仿溶液对照品：上述各成分对照詁乙醇溶液展开剂：石汕瞇（30〜60°C）-醋酸乙酯-甲酸（15：5：1）上层溶液显色：在可见光下观察，记录黄色斑点的位置。然后再川浓氨水熏蒸或喷雾5%醋酸镁甲醇溶液，斑点应显红色。（五）实验说明及注意事项1.大黄中恿覘类化合物的种类、含量与大

6、黄的品种、采集季节、炮制方法及贮存时间均有关系，实验用药材应注意。2.萃取用pH8缓冲液为柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液；pH9.9缓冲液为碳酸氢钠-碳酸钠缓冲液。配制好的缓冲液要测pH值。一般萃取大黄酸用pH7〜8范围的，萃取大黄素用pII9.5〜11范围的。3.用各缓冲液进行苹取时，采用一次性加入的方法，实验证明，如将缓冲液分次萃取，分离效果不理想。4.木实验也适应丁以虎杖为原料的捉取，但虎杖中不含大黄酸，故直接出大黄素开始分离。5.色谱分离人黄酚及人黄索甲醴时，先用氯仿洗脱至出现黄色色带时，改用氯仿一酷酸乙酯（8：2）混介溶剂继续洗脱，并更换收

7、集器，每10ml为一份，按顺序编号，直至色谱柱的第一色带全部洗脱下來为止。各流分经硅胶-CMC-Na板，氯仿一醋酸乙酯（8:2）展开，用大黄酚和大黄素甲瞇作对照，合并斑点和同流分，分别浓缩、放置析晶，即可获得大黄酚及大黄素甲醛。（六）思考题1.大黄中5种轻基恵醍化介物的酸性和极性大小应如何排列？为什么？2.pH梯度萃取法的原理是什么？适用丁•哪些中药成分的分离？3.恿陀类化合物及其靑的薄层色谱用什么作吸附剂、展开剂和显色剂？4.恿醜类与酷酸镁显色反应的必要条件是什么？其颜色反应与疑基所在的位置有何关系？