黑皮鸡枞菌液体培养基优化

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1、万方数据·24内江师范学院学报第28卷第10期JOURNALOFNEIJIANGNORMALUNIVERSITYNo．10V01．28黑皮鸡枞菌液体培养基优化薛林浩1，王晓东1，蔡虹1，范红春1，党会1，黎勇1’2(1．内江师范学院生命科学学院，四川内江641100；2．四川省特色农业资源研究与利用重点实验室，四川内江641IOO)摘要：试验比较不同pH条件及培养基配方对黑皮鸡枞菌丝体(球)生长的影响以探讨最佳液体培养黑皮鸡枞最佳的pH及配方条件．通过预实验筛选出玉米粉、麸皮、大豆粉、K。HPO。、MgSO。为碳源、氮源及微量营养因子；用四因素四水平正交表进行试验，以菌丝体的干物

2、质量为基准比较．结果表明：液体培养条件下，获得最高黑皮鸡枞菌丝体生物量的最佳配方为：麸皮14g／L·玉米粉11g／L·大豆粉2g／L·KH：PO。1．29／L·MgSO。0．9g／L；最适pH为6．0．关键词：黑皮鸡枞；液体培养基；优化中图分类号：Q939．99文献标志码：A文章编号：1671—1785(2013)10一0024一04鸡枞菌(termitomycesalbuminosus)是口蘑科(tricholomataceae)真菌中的一种味道鲜美的珍希食用菌口]．含有人体必需的蛋白质、氨基酸、脂肪，具有补气益血、益胃、清神、治痔等功效[2]，鸡枞菌属包括鸡枞菌属(或称蚁巢伞

3、属)和华鸡枞(sinotermito—myces)L3]．根据付子艳的世界鸡枞菌检索表可知黑皮鸡枞学名烟灰鸡枞菌(termitomycesfuligi—rlOUS)，属鸡枞菌属[4]．黑皮鸡枞菌是科研人员经过数年心血专研口]，于2006年选育出能人工栽培的珍稀食用菌，胡尚勤[6]、曾先福[71等对鸡枞菌的生长条件有研究．实践表明液体菌种是一种高效的菌种[8]，有利于提高接种效率与菌种的快速恢复生长；罗晓妙凹3优化了鸡枞菌的液体培养条件，但目前对于黑皮鸡枞菌丝的液体发酵条件的优化尚未见到报道．仅王小丹等口叩人在改良PDA培养基上培养过菌丝．有研究表明[11-12]pH对食用菌菌丝的

4、生长有很大影响．同时培养基中不同比例的营养元素对菌丝也有显著的影响[13

5、，本文通过黑皮鸡枞菌丝在不同pH培养基中的生长情况筛选出最适合的pH，通过四因素四水平正交表进行液体培养的试验筛选出最优的配方，试验数据将为生产提供一定的依据．1材料与方法1．1菌种2012年6月购自绵阳食用菌研究所母种，转管扩大培养到长满斜面2／3后，选择菌丝洁白生长良好者为试验菌种．1．2培养基配方及制作方法1．2．1母种活化培养基：参照王小丹[1们改良的培养基．1．2．2pH对比培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，水1000mL，酵母浸膏2∥L，VB，3rag／L，VB6mg／L将配方培养基熬好后，

6、用o．01mol／LNaOH和o．01mol／L的HCI将pH分别调节为3、4、5、6、7、8、9备用．1．2．3优化前液体培养基：玉米粉20∥L、麸皮10∥L，加少量VBl、Vc[9]，取各种原料于1000mL烧杯中加适量蒸馏水煮沸20rain后用8层纱布过滤，定容收稿日期：2013-04—22基金项目：四川省科技厅重点科技项目(2009JY0129)；内江师范学院大学生科研(项目号11NSD一173)作者简介：薛林浩(1990一)，男，四川新都人，内江师范学院2009级学生．研究方向：食用菌栽培技术．通讯作者：黎勇(1968一)，男，四川夹江人，内江师范学院副教授．研究方向：

7、微生物学教学科研．万方数据2013年10月薛林浩，王晓东，蔡虹，等：黑皮鸡枞菌液体培养基优化·25·至1000mL．市售麸皮粉碎过40目筛，市售大豆粉碎过40目筛，市售玉米粉粉碎过40目筛[1引．1．3菌种活化与培养1．3．1菌种活化将母种活化培养基倒人9cm×9cm平皿中，在超净工作台中接种后置于25℃恒温培养箱中，当菌丝长满平板2／3后置于4℃冰箱中保存备用．1．3．2正交法配方优化设计通过预实验筛选出，A，B，C，D分别为碳源，氮源添加物及微量营养因子，进行L44正交实验，见表1，实验重复3次．表1正交法配方优化设计表注：A为玉米粉g／L，B为麸皮g／L，C为大豆粉g／L，

8、D为K2HP04+MgSO。g／L1．3．3液体培养在超净工作台中用接种铲从活化母种平板上切取1cm2菌种两片分别接种于不同优化培养基中，置于25℃恒温摇床中静置48h后，140r／min震荡培养168h后用脱脂棉过滤菌丝体，所获菌丝体60℃恒温鼓风烘箱中烘干至恒重[6]，减重法计算生物量．1．4主要仪器设备恒温震荡培养箱(型号DHZ—DA)，电热恒温鼓风干燥箱，超净工作台，高压灭菌锅，电子天平，冰箱等．1．5数据分析采用SAS9．1数据分析软件进行方差分析．2结果分析2．1不同