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《一种噻嗪类利尿药用药指导的多重SNP检测方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、一种卩塞嗪类利尿药用药指导的多重SNP检测方法摘要：目的：为患者提供一种用于嗟嗪类利尿药用药指导的多重SNP检测方案。方法:采用多重PCR和毛细管电泳片段分离技术，同步检测15个SNP位点的30个基因型。结果：30个基因型、1个人基因组DNA内参及1个PCR反应内参可以在同一个反应管中扩增，在毛细电泳时清晰分离。关键词：卩塞嗪类利尿药；SNP；个体化用药自1957年氯卩塞嗪问世以来，以氢氯曝嗪为主的卩塞嗪类利尿药一直是临床治疗高血压病的常用一线药物，但在临床应用中，其疗效和副作用存在着明显的个体差异。研究表明，这
2、些个体差异与单核昔酸多态性（SNP）密切相关，其中15个位点：SLC12A3rsl3306673[l],WNK1的rsll59744[2]>rs880054⑶、rs2277869⑵⑶、rs2286007[2]和rs2107614[2]>NOS3rsl799983⑷和rs2070744[5],ADRB2rs2400707[2]>SLC22A6rsl0792367⑹、ACErsl799752[7],YEATS4rs7297610⑻，CYP11B2rsl799998[7],ADD1rs4961[9],NEDD4Lrs4
3、149601[10]尤其重要，检测这些基因型可以提前预估卩塞嗪类利尿药的疗效和敏感性等。本研究开发了一种用于卩塞嗪类利尿药用药指导的多重基因检测试剂盒，同步检测10个基因15个SNP位点的等位基因型，为临床提供了一种卩塞嗪类利尿药用药指导多重基因检测方案。1.材料和方法DNA提取以抗凝静脉血作为样本进行DNA提取。DNA提取在自动化提取工作站SmartLabAssist-32（台湾圆点奈米技术有限公司）上完成。试剂盒使用“核酸自动提取试剂盒（磁珠法）”（宁波海尔施基因科技，货号：1060055）oPCR扩增PCR
4、扩增反应：PCR预混液16L、TaqDNA聚合酶2?L、样品DNA/5FU阳性对照2L。混匀后按以下温度进行热循环反应：94°C3分钟；94°C30秒，60°C30秒，70°C30秒，共35个循环；72°C3分钟；4°C保存产物。DNA片段分离采用GeXP遗传分析仪（美国贝克曼库尔特公司）进行DNA片段分离，详见说明书。1.结果卩塞嗪类试剂盒检测人DNA样品，因每个SNP位点有可能出现2个基因型峰，故共可能岀现17-32个特征峰，其中15-30个为SNP特征峰、1个人DNA内参特征峰和1个PCR反应内参pcDNA
5、特征峰。阳性对照检测结果应出现全部32个特征峰(图1)。图1、本试剂盒检测阳性对照结果。共出现32个特征峰：30个基因型峰和2个内参峰。2.讨论目前常用的SNP检测方法：qPCR法的优点是灵敏度高、准确性强，其缺点是通量低且探针成本高；DNA芯片有高通量等优点，其缺点为成本昂贵、灵敏度低、重复性差且准确性低；Sanger测序法是SNP分析金标准，能发现已知SNP和未知SNP,缺点是工作量大，周期长，多位点检测累计价格相对昂贵。本研究提供了一种快速、准确同步检测多个SNP位点用于指导嗟嗪类利尿药用药指导的新方法。目
6、前,国内外尚无类似的研究报道。参考文献：[1].MatayoshiT,etal.Thethiazide-sensitiveNa(+)-Cl(-)cotransportergene,C1784T,andadrenergicreceptor-beta3gene,T727C,maybegenepolymorphismssusceptibletotheantihypertensiveeffectofthiazidediuretics.[J]HypertensRes.2004Nov；27(11)：821-33.[1].Tu
7、rnerST,etal.WNKlkinasepolymorphismandbloodpressureresponsetoathiazidediuretic.[J]Hypertension.2005Oct；46(4)：758-65・[2].ManuntaP,etal.Physiologicalinteractionbetweenalpha-adducinandWNK1-NEDD4Lpathwaysonsodium-relatedbloodpressureregulation.[J]Hypertension.2008
8、Aug；52(2)：366-72・[3].TurnerST,etal.Effectsofendothelialnitricoxidesynthase,alpha-adducin，andothercandidategenepolymorphismsonbloodpressureresponsetohydrochlorothiazide.AmJHypertens.2003Oc
