乙肝核心抗体作业指导书

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1、ElecsysE170/E411乙肝核心抗体1.分析原理原理:采用竞争法原理,整个过程27分钟完成。・第1步:40M标本用还原试剂预处理。・第2步:加入HBc抗原液,标本中的抗-HBc与HBc抗原结合形成复合物。•第3步:加入生物索化的和钉标记的抗l【Bc抗体以及链孫亲和素包被的微粒,HBc抗原上仍然游离的位点彼占据。形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。•第4步:反应混和液吸到测帚池中,微粒通过磁铁吸附到电极I:,未结介的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍増管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从抗HBc定标液得出的Cut

2、off值相比较。2.标本要求血淸:按标准常规方法采集。血浆:肝素钠、EDTA-Ks.枸椽酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝。标本在2—8度可稳定5天,-20度可稳定3个月。标本可冻融5次。注意:冻融过的标本、有沉淀的标本、反复测定过的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料釆用罗氏原装配套试剂。试剂:M:链得亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力:470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。RO:DTT(白盖),1瓶,5ml:二硫苏糖醇,浓度1lOnimol/1;枸椽酸缓冲液50mmol/l.Rl:HBcA

3、g(灰盖〉,1瓶,8ml:HBcAg(E.coli,rDNA)浓度高于25ng/ml,磷酸缓冲液0.lmol/1,pH7.4,含防腐剂。R2:生物素化的抗HBcAg抗体;Ru(bpy)$2+标记的抗HBcAg抗体(黑盖),1瓶,8ml:牛物素化的抗HBcAg单克隆抗体浓度高于800ng/rol;Ru(bpy)标记的抗HBcAg单克隆抗体浓度高于130ng/ml;磷酸缓冲液0.lmol/1.pH7.4,含防腐剂。校准品:Cal1阴性定标液(白盖),2瓶,1.0ml/瓶人血清,含防腐剂Cal2阳性定标液(黑盖〉,2瓶,1.0ml/瓶,抗HBc(人)浓度高于8PEIU*/ml,人血淸,

4、抗HCV和抗HIV1+2无反应性。含防腐剂。质控品:Elecsys抗HBc质控品1和2(PreciControl抗HBc)货号1876325其他所需材料:・Elecsys通川稀秫液货号1732277•Elecsys2010分析仪•Elecsys系统缓冲液(ProCell)货号1662988•Elecsys测屋池淸洗液(CleanCell)货号1662970•Elecsys添加剂液(SysWash)货号1930346•Elecsys系统清洗液(SysClean)货号12985004.仪器和校准使用仪器:瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys2010/E170/E411全口动电化学发光免

5、疫白动分析仪仪器校准:每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗HBcCall,Cal2定标一次。另外,以下情况需耍再次定标:ElecsysE170/E411Elecsys2010:・一个月(同一批号试剂)・7天(放宜仪器I二的同一•试剂盒)•根据要求进行标定:如质控结果超出范囤时;・根据规定逬行多次标定。定标范用:(电化学发光信号计数)阴性定标液(Cal1)27,000200,000阳性定标液(Cal2)100-30001.操作步骤(以E170为例〉5.]校准操作步骤:在编组各项目的参数时,已经在Application-Calib菜单中定义好了定标类型和儿点定标。因此在对各项目进行定标时,只

6、需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration-Status菜单,用鼠标选择需定标的项目,再根据需耍点单点定标(BLAK键)或两点定标(TWOPOINT键)、跨距定标(SPAN犍)、多点定标(FULL键),再选择其它项冃进行相应选择,最后点SAVE»将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位昼,点Start,再点Start,仪器开始定标。在Calibration—Status菜单中看定标结果,点CalibrationResult键看定标结果,点ReactionMonitor键看每个定标物的反应曲线.5.2样本检测程序:

7、单个样本输入,在主菜单I、选择Workplace-Testslection,在SequenceNo栏输入标本号,然后选择该标本所需做的单个项冃或组合项冃,点SATE键,样本号自动累加。批肚常规标本的输入,在主菜单下选择Workplace-Tcstslcction,在SequenceNo栏输入起始标本号,然后选择该标本所需做的单个项冃或组合项冃,点REPEAT,输入该批标本的最后一个标本号,点OK即可。进样分析,将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好,放入

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