肿瘤“液体活检”研究进展

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1、《癌症进展》2016年12月第14卷12期综述1203ONCOLOGYPROGRESS,Dec2016,Vol.14,No.12肿瘤“液体活检”研究进展李倩马力文#北京大学第三医院肿瘤化疗与放射病科，北京1001910摘要：“液体活检”不仅使肿瘤基因型的非侵袭性检查变为可能，而且很好地克服了肿瘤的时空异质性，为实现精准医疗提供了高效工具，发展前景十分广阔。近年来，“液体活检”技术已经逐渐渗透到了临床肿瘤的诊治过程，但由于其价格昂贵和检测标准不统一等限制因素，临床应用尚在起步阶段。本文就肿瘤领域目前最主要开展研发的CTC、ctDNA及外泌体3个对象作一简要综述。关键词：CTC；ctDNA；

2、外泌体；“液体活检”中图分类号：R730.4文献标志码：Adoi：10.11877/j.issn.1672-1535.2016.14.12.10癌症治疗的瓶颈很大程度上在于肿瘤实时取等，分离富集方法有筛网过滤法和密度梯度离心样困难、疗效评估滞后、耐药位点难以发现等，液体法；基于生物学特性的分离富集方法是利用CTC活检技术克服了组织取样困难，可能会成为未来颠的免疫亲和性，常见的如免疫磁珠富集法等。也覆医疗领域的技术之一，使临床诊治产生质的飞可通过另一种方法分为阳性选择（正向）富集法跃。目前，液体活检技术主要涵盖循环肿瘤细胞（例如MACS、CellSearch系统以及CTC-chip）及阴（

3、CTC）、ctDNA及外泌体三个领域，本文拟对其各性排除（负向）富集法（例如CD45磁珠、IMB法），自特点、检测技术、临床应用等方面做一简要综述。前者纯度高，回收率低；后者回收率高，纯度低。1CTC对分离富集的CTC进行分析检测的技术有简单的CTC是从肿瘤原发灶（继发灶）进入血液循环细胞计数法和分子检测法，后者主要检测CTC中的肿瘤细胞。CTC可以单个细胞和成簇形式从病的核酸（DNA、RNA等）或蛋白，常用的传统方法包灶脱落入外周血，在形态及功能上存在很大异质括逆转录聚合酶联反应（RT-PCR）和免疫细胞化学性，活力强，具有抗脱巢凋亡活性和侵袭转移能法等，但以上方法检出效率较低。为了提

4、高检测[1]灵敏度和检测范围，大量新兴前沿检测技术被开力，在血液中的存活半衰期为1～2.4h。存活的[2]发出来，如光纤阵列扫描术、酶联免疫斑点术、CTC需通过进入第二个器官方能得以清除。肿瘤细胞转移至远处脏器，血管成为了必经之路，CTC-chip、高通量基因测序（NGS）以及TumorFish-CTC可通过与激活的血小板和巨噬细胞相互作用er纳米微流控技术等。CTC检测技术日趋成熟，已[3]逐渐从实验室走向临床应用，如将CTC富集与计而得以孵育。血液中检测到CTC不代表一定存在转移，早期肿瘤外周血中即可检出CTC，只有具数结合在一起的CellSearch系统已被美国食品和有干细胞特征的

5、CTC侵入第二器官形成的微转移药品管理局（FDA）批准应用于乳腺癌、结直肠癌灶逃避免疫识别后才能成为转移灶。CTC亦能够及前列腺癌等预后评估，该系统特异度高但敏感[4]度较低，且对于肺癌的检测效能较差。近年来，再次回到原发部位，叫做“回巢”。研究发现，CTC上携带的肿瘤坏死因子（TNF）可以通过“回CytoploRare（格诺）通过免疫磁珠负向富集靶向配巢”杀灭部分原发灶肿瘤细胞，亦可称为“以癌抗体PCR技术在肺癌CTC检测中仅需3ml血样，即[5]可获得80%的灵敏度及88%的特异度，在肺癌检测癌”。目前主要通过上皮标志如EPCAM和角蛋[6][8]白来识别CTC。然而，如果发生上皮间

6、质转化尤其早期肺癌筛查中优势十分明显。此外，依靠（EMT），上皮标志表达会下降，干细胞样表型会增GFP病毒载体侵染捕获CTC的技术亦有开展。但[6]目前仅CellSearch系统获FDA批准。加，其适应力和侵袭浸润能力也会相应增加。例如结肠癌细胞系中发生该转化的CTC在强表达1.2临床应用EPCAM、细胞角蛋白的同时，也表达SNAIL、AL-CTC在预测预后方面具有较大的优势，其数[7]目及其间质化程度（E/M比例）与疾病进展显著相DH1和CD133。[5]1.1检测方式关。美国AJCC2010年制订的肿瘤分期指南中，CTC检测技术通常包括分离富集和分析检测已经把CTC作为一个新的M分期

7、（远处转移）标两个步骤。CTC的分离和富集方法主要基于其物准，作为cM（0i+）出现在M0和M1之间。一项来自理性质或生物学特性，前者包括细胞大小、密度4703例患者的研究发现在辅助化疗前后CTC数目#通信作者（correspondingauthor），邮箱：malw678@126.com万方数据ONCOLOGYPROGRESS,Dec2016Vol.14No.121204与原发乳腺癌的复发风险增高有关：在早期乳腺度、DNA突变、甲