流式细胞术检测人外周血Th17细胞频率

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1、国际检验医学杂志２０１４年８月第３５卷第１５期ＩｎｔＪＬａｂＭｅｄ，Ａｕｇｕｓｔ２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１５·２０６９··检验技术与方法·＊流式细胞术检测人外周血Ｔｈ１７细胞频率肖平，吴祖常，林蔚（广东省佛山市第一人民医院临床医学研究所，广东佛山５２８０００）摘要：目的该研究通过探讨不同的刺激培养条件和检测方法对Ｔｈ１７细胞频率的影响，建立和优化流式细胞术检测人外周血Ｔｈ１７细胞频率实验方案。方法采用不同浓度的佛波酯（ＰＭＡ，终浓度５０、１００、１５０、２００、２５０、３００ｎｇ／ｍＬ）与离子霉

2、素（Ｉｏｎ－ｏｍｙｃｉｎ）１μｇ／ｍＬ对健康人外周血进行刺激培养，分别于刺激后４、６、８、１０和１２ｈ用流式细胞术分析Ｔｈ１７细胞频率，并检测ＰＭＡ刺激前后细胞表面与胞膜内ＣＤ４平均荧光强度（ＭＦＩ）和ＣＤ４阳性Ｔ细胞比例。结果ＰＭＡ１５０ｎｇ／ｍ＋Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ１μｇ／ｍＬ刺激全血６ｈ后，Ｔｈ１７细胞频率高，刺激的效果较好（Ｐ＜０．０５）。刺激后检测细胞膜内ＣＤ４ＭＦＩ低于先标记膜表面ＣＤ４后刺激组（Ｐ＜０．０５），Ｔｈ１７细胞频率和ＣＤ４阳性Ｔ细胞比例均高于后者，差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５

3、）。结论采用终浓度为ＰＭＡ１５０ｎｇ／ｍＬ＋Ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ１μｇ／ｍＬ刺激培养全血６ｈ后，测定胞浆内ＣＤ４和ＩＬ－１７水平是检测人Ｔｈ１７细胞频率简便有效的方法。关键词：流式细胞术；Ｔｈ１７细胞；体外活化ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４１３０．２０１４．１５．０４４文献标识码：Ａ文章编号：１６７３－４１３０（２０１４）１５－２０６９－０３ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＴｈ１７ｃｅｌｌｓｉｎｈｕｍａｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔ

4、ｒｙ＊ＸｉａｏＰｉｎｇ，ＷｕＺｕｃｈａｎｇ，ＬｉｎＷｅｉ（ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ，ＦｏｓｈａｎＭｕｎｉｃｉｐａｌＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅ′ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，，Ｆｏｓｈａｎ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ５２８０００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｏｎｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆ

5、Ｔｈ１７ｃｅｌｌｓａｎｄｔｏｓｅｔｕｐａｎｄｏｐｔｉｍｉｚｅｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆｈｕｍａｎＴｈ１７ｃｅｌｌｓｉｎｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｉｎｔｈｅｈｅａｌｔｈｙｐｅｏｐｌｅｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｈｅｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｃｕｌｔｕｒｅｂｙｐｈｏｒｂｏｌｍｙｒｉｓｔａｔｅａｃｅｔａｔｅ（ＰＭＡ）ａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｉｎａｌ

6、ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（５０，１００，１５０，２００，２５０，３００ｎｇ／ｍＬ）ａｎｄｉｏｎｏｍｙｃｉｎ１μｇ／ｍＬ．ＴｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓｏｆＴｈ１７ｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｓｓｅｓｓｅｄｂｙＦＣＭａｆｔｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｔｉｍｅｐｏｉｎｔｓ（４，６，８，１０，１２ｈ）．Ｔｈｅｍｅａｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎ－ｔｅｎｓｉｔｙ（ＭＦＩ）ａｎｄｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｏｆｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＣＤ４ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓｏｎｔｈｅｃｅｌｌｕｌａｒｓｕｒｆａｃｅａｎｄｉ

7、ｎｓｉｄｅｃｅｌｌｍｅｍｂｒａｎｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｅ－ｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒＰＭＡｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｆｒｅｑｕｅｎｃｙｏｆＴｈ１７ｃｅｌｌｓｗａｓｈｉｇｈｅｓｔｗｉｔｈｔｈｅｇｏｏｄｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｅｆｆｅｃｔｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｄｉ－ｔｉｏｎｏｆＰＭＡ１５０ｎｇ／ｍＬａｎｄｉｏｎｏｍｙｃｉｎ１μｇ／ｍＬｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎｆｏｒ６ｈ（Ｐ＜０．０５）．ＭＦＩｏｆＣＤ４ｉｎｓｉｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｍｅｍｂｒａｎｅａｆｔｅｒｓｔｉｍｕｌａ－ｔｉｏｎｗａｓｌｏ

8、ｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓｗｉｔｈｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎａｆｔｅｒｌａｂｅｌｉｎｇｍｅｍｂｒａｎｅｓｕｒｆａｃｅＣＤ４（Ｐ＜０．０５），ａｎｄｔｈｅＴｈ１７ｃｅｌｌｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓａｎｄｔｈｅｒａｔｉｏｏｆＣＤ４ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｌａｔｔｅｒ，ｂｕｔｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｗｅｒｅｎｏｔｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎＡ