流式细胞术检测细胞周期.doc

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1、流式细胞术检测细胞周期（PI染色）操作步骤1、将单细胞悬液加入2ml圆底离心管中，离心，1500rpm,5min，弃上清液。2、加入PBS1ml离心洗涤1次，弃上清。3、加入2ml预冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定过夜。4、离心，弃上清液。5、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。6、加入RNaseA(工作浓度20ug/ml)于500ul1×PBS中，37℃孵育30min，离心。7、用1×PBS1ml洗涤1次，离心。8、加入PI(工作浓度50ug/ml)于500ul1×PBS中，室温避光孵育30min。9、混匀，过300目筛网，置流式管中，4℃冰箱保存，待测。10

2、、用流式细胞仪检测细胞周期11、用Flowjo软件分析流式细胞仪检测数据，并导出细胞周期分析结果备注：1、RNaseA：贮液浓度：1mg/ml；工作液配制：加1mg/ml贮液10ul于500ul1×PBS中，使终浓度为20ug/ml。2、PI：贮液浓度：2.5mg/ml；工作液配制：加2.5mg/ml贮液10ul于500ul1×PBS中，使终浓度为50ug/ml。4、检测样品细胞浓度1x106/ml。