流式细胞仪检测外周血树突状细胞

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1、流式细胞仪检测外周血树突状细胞分析CD123+（抗IL-3受体a链）和CD11c+树突状细胞亚群概述树突状细胞（DC）的主要功能是吸收抗原，进行加工，并向T淋巴细胞呈递。其它抗原呈递细胞也有此功能，如B淋巴细胞和单核细胞。但是，与其它细胞不同的是，DC细胞具有诱导初发免疫反应的独特功能，例如，可以活化处女T细胞（NaiveTcell）。DC细胞存在于外周淋巴组织中，已在血液和非淋巴器官中发现了不同类型的DC细胞，并被认为是淋巴组织中细胞的前体。由于血液和组织中DC细胞含量少，且缺乏特异的DC标记物，所以

2、DC细胞的研究非常困难。因此，关于DC细胞的了解主要来自于通过密度梯度离心、培养、和/或阴性选择富集后的DC细胞的研究。这些过程利用了DC细胞的密度和黏附特征，和在一定细胞因子条件下的选择性生长，或缺乏淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的系列标记物的表达。但是，这些方法中DC细胞的产率和纯度较低，且费时费力。而且，这些操作可以影响细胞的功能，并且无法做DC细胞含量的定量分析。最近的报告发现在活化DC细胞和血液或淋巴细胞分离培养的DC细胞表面CD83和CMRF-44高表达。CD83和CMRF-44可以作为DC细胞

3、的活化标志物，但在体内或未处理的细胞上没有特征性表达，或表达水平很低。在对新鲜分离的DC细胞的研究中，发现IL-3Ra在淋巴器官的DC细胞上有特异表达。从人类外周淋巴组织中分离的单个核细胞中主要是此类DC细胞。IL-3Ra（CD123）抗体可以用来进行免疫磁珠分选，从外周淋巴组织制备的单个核细胞样本中，将CD123+DC细胞进行200倍富集。CD123抗体还可以用来做免疫组化分析，特异识别滤泡外T细胞富集区的CD123+DC。在外周血中也有CD123+DC细胞，与以前所说的CD11c-DC细胞和CD33

4、dimCD14-CD16-DC细胞是同一类细胞。由于缺乏DC特异性标记物，目前仍然不清楚DC是否是自成一系的一类细胞。DC细胞既可以由成熟的外周血单核细胞生成，也可以由未分离的CD34+干祖细胞经GM-CSF和TNF-a培养得到。使用CD123抗体，发现有一群CD34+DC样幼稚细胞。这群细胞与CD34+干祖细胞的区别是可以发育成Langerhan细胞样DC。因此，根据CD123强染，可以识别出一类人类DC细胞，它是不同组织间DC细胞的连接桥梁。在外周淋巴组织中还发现另一个DC亚群，与CD123+DC不

5、同的是，其表型为CD11c+HLA-DR+LINdim/-。与CD123+DC相反，这群DC细胞位于生发中心。在血中也含有CD11c+HLA-DR+LINdim/-DC细胞，与CD33brightCD14dimCD16-DC细胞是同一类细胞。由此可见，DC系统由多种细胞类型构成，发育途径不一。但是，目前对这些细胞的功能和可能的特殊性、在生理或病理条件下如何受调控等方面仍缺乏了解。CD123+DC和CD11c+DC细胞具有不同的表型，在淋巴器官中的位置也不同，提示它们可能有不同的功能。近年来的研究主要集中

6、在使用DC细胞进行抗肿瘤和抗感染治疗方面。不同报道证实，这有可能抑制肿瘤生长。使用这些新的DC标记物建立起来的检测系统，可以帮助对新鲜外周血新鲜中的两类不同的DC细胞进行定量检测，同时可以加以分离。实验方法采用三色或四色流式细胞仪分析，检测速度快，样本用量少，可以用来辅助研究在病理和生理条件下，DC在免疫调控中作用。检测原理和用具检测原理：本实验目的是从外周血中检测两种类型的DC细胞：CD123+DC（Anti-IL-3Ra+）和CD11c+DC。CD11c和CD123并不是DC特异的标志物。两类细胞均

7、HLA-DR高表达，单核细胞、淋巴细胞和NK细胞的系列标记物弱表达。因此使用单一荧光标记的LINcocktail（LIN1）抗体将DC细胞区分出来。LIN1抗体包括CD3、CD14、CD16、CD19、CD20和CD56。另外，本实验还可以区分嗜碱粒细胞。嗜碱粒细胞的表型是：LIN1-CD123+HLA-DR-。使用HLA-DR可以区分嗜碱粒细胞和CD123+DC细胞。细胞来源：样本使用EDTA、ACD或肝素钠抗凝全血，或分离的外周血单个核细胞（PBMC）。样本采集后24小时内检测。试剂：1.检测DC细

8、胞用的BDIS荧光标记的单克隆抗体。四色分析：LIN1FITC：货号340546，含有CD3、CD14、CD16、CD19、CD20、CD56CD123PE（Anti-IL-3Ra）：货号340545Anti-HLA-DRPerCP：货号347364CD11cAPC：货号340544MouseIgG1PE：货号349043MouseIgG2aAPC：货号340473三色分析：LIN1FITC：货号340546，含有CD3、CD14、CD16