阿维a调节外周血树突状细胞相关免疫功能的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文阿维A调节外周血树突状细胞相关免疫功能的实验研究姓名：于亮申请学位级别：硕士专业：皮肤病与性病学指导教师：李艳佳201203中文摘要阿维A调节外周血树突状细胞相关免疫功能的实验研究摘要目的：树突状细胞(dendriticcelIs，DCs)是体内功能最强的、专职的抗原呈递细胞(antigenpresentingcell，APC)，是唯一能够激活“初始型”免疫反应的细胞，可显著地刺激初始T细胞的增殖和活化，在免疫应答的启动和免疫调控方面发挥着重要作用，是最强大的次级免疫反应的诱导物。‘维甲酸类

2、(retinocacid，RA)是维生素A的天然及人工合成的衍生物。包含多种同分异构体：13．顺式维甲酸(13．cis．retinoicacid，13．eRA)，全反式维甲酸(a11．transretinoic，ATRA)，9．顺式维甲酸(9．cis．retinoicacid，9．eRA)等。它能影响细胞的增殖和分化，调控多种细胞的形态变化并参与细胞凋亡代谢过程，在临床实践中多用来预防及治疗多种皮肤病。近年来科学研究发现它对人体免疫系统具有很强的调节作用。阿维A为第二代维甲酸类药物，化学名称是全反式．9．(4．甲氧

3、基．2，3，6．三甲基苯基)．3，7一二甲基．2，4，6，8一壬四烯酸，具有调节表皮细胞分化和增殖的作用，临床上用于治疗多种皮肤病，如银屑病、角化性皮肤病等。本实验研究阿维A作用于正常人外周血DCs通过观察DCs的形态，流式细胞仪技术检测DCs表面标记CD83、CD86的表达，应用酶联免疫吸附实验检测细胞因子IL．12的量及用同种异体混合淋巴细胞反应来评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力，来探讨阿维A调节人免疫系统的机制，进而为临床治疗自身免疫性疾病提供实验基础。方法：l细胞培养采集并分离lO例健康人外周血单个核细胞

4、在含15％胎牛血清的RPMI．1640培养基(含青霉素100U／ml，含链霉素100U／ml，PH7．2)和rhlL．4和rhGM．CSF的作用下，置于5％C02和37℃培养箱中培养。2运用流式细胞仪技术(Flowcytometry，FCM)检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD83的表达情况中文摘要将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿维A浓度为lnmol／L一组和阿维A浓度为10nmol／L一组。阴性对照组不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物干预12h，收集细

5、胞，应用FCM检测各组细胞表面标记CD83的表达情况。3运用FCM检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD86的表达情况将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿维A浓度为lnmol／L一组和阿维A浓度为10nmol／L一组。阴性对照组不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物干预12h，收集细胞，应用FCM检测各组细胞表面标记CD86的表达情况。4倒置相差显微镜观察经过不同浓度药物处理前后DCs的形态变化。5用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同浓度的阿维A对DCs干预1

6、2h后细胞因子的分泌的影响。将实验分为3组，分别为阴性对照组和两个加药组，加药组分别为阿维A浓度为1nmol／L一组和阿维A浓度为10nmol／L一组。阴性对照组不加阿维A培养8天，加药组在培养第7天按药物的不同浓度加入药物干预12h，收集细胞的培养上清液，应用ELISA法检测各组细胞培养上清液中IL—12的水平。6用同种异体混合淋巴细胞反应来评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组DCs对同种异体混合淋巴细胞增殖的程度。7运用统计软件SPSS13．0对数据进行统计分析。结果：1运

7、用FCM检测与细胞免疫成熟和激活相关的表面标记CD83的表达情况。经不同浓度药物作用后，与阴性对照组相比，表面标记CD83的表达明显增高，阴性对照组、不同浓度阿维A干预12h后，CD83的表达量分别为42．554-10．58、52．93+12．87、59．80+12．47，分别进一步进行两两比较也都有显著性差异(p

8、CD86的表达量分别为57．49-a：10．63、67．24士10．55、72．89士10．18，分别进一步进行两两比较也都有显著性差异(p