吸光度法快速确定菌悬液浓度及其适用范围_马秀玲

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1、90微生物学杂志2014年8月第34卷第4期JOUＲNALOFMICＲOBIOLOGYAug．2014Vol．34No．4吸光度法快速确定菌悬液浓度及其适用范围马秀玲，陈蕊君，王飞，徐腾月(中国人民解放军总后勤部军需装备研究所，北京100010)8摘要采用麦氏比浊法，将大肠埃希菌的菌悬液浓度调整到约8×10cfu/g，再将其稀释成多个梯度，在600nm的波长下用紫外分光光度计测定吸光度值，同时将各个梯度的菌悬液分别做菌落总数试验，得到不同吸光度值对应的菌落总数，并制作标准曲线，通过测量菌悬液的吸光

2、度值确定菌悬液浓度及其适用范围。试验证585明，用此法确定菌悬液浓度时，其菌落总数宜在10～10cfu/g之间，不适用于在10cfu/g以下的菌悬液，所得结果比麦氏比浊法准确。关键词麦氏比浊法;吸光度;菌悬液浓度中图分类号Q93-3文献标识码B文章编号1005－7021(2014)04－0090－03doi:10．3969/j．issn．1005－7021．2014．04．018DeterminationofBacterialSuspensionConcentration＆theScopeofAp

3、plicationUsingAbsorbanceMethodMAXiu-ling，CHENＲui-jun，WANGFei，XUTeng-yue(Inst．ofMil．Suppl．ofEquipm＇t，Gen．LogisticsDept．ofCPLA，Beijing100010)AbstractTheMcFarland’sturbidimetrymethodwasusedtoadjusttheconcentrationofE．colibacterialsuspension8to8×10cfu/g，t

4、hendilutedintoseveralgradientstomeasureabsorbancevaluesbyUVspectrophotometerat600nmwavelength，atthesametime，testedthetotalnumbersofcolonyofseveralgradientsbyplatecountmethod．TooktotalnumbersofcolonyasX-axisandabsorbancevaluesasY-axistodrawastandardcur

5、ve．Thepurposewastodeterminerapidlytheconcentrationofbacterialsuspensionandthescopeofapplicationwiththeabsorbancemethod．Theresult58showedthattheeligibleconcentrationofbacterialsuspensionwas10～10cfu/gwiththeabsorbancemethod，which5couldnotbeusedforbacter

6、ialsuspensionbelow10cfu/g，andthedataweremoreaccuratethanthoseofMcFarland’sturbidimetry．KeywordsMcFarland’sturbidimetry;absorbance;bacterialsuspensionconcentration微生物生长中细胞数量的测定主要有直接计光密度呈线性关系，因此，待测菌悬液的浓度不宜数法(测定时需用细菌计数器或血球计数板，本法过高或过低，过高会超过仪器的测量范围并且细仅适于单细

7、胞的微生物类群)、比浊法、稀释平板胞浓度与光密度不呈线性关系，同时要求培养液计数法、液体稀释培养计数法、浓缩法。在一定的的颜色不宜过深，并尽量减少颗粒性杂质的数量。浓度范围内，菌悬液中的微生物细胞浓度与液体该方法的优点是快捷简便，容易操作;缺点与麦氏的光密度(OD值)成正比，与透光度成反比，因此比浊法相同，即难以区分活细胞与死细胞以及与可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知微生物类似的杂质。另外，形状不规则的某些霉菌悬液的浓度。由于细胞浓度仅在一定范围内与菌、放线菌，因菌悬液浓度并不能代表细胞

8、数量，作者简介:马秀玲女，工程师。现从事食品检验工作。Tel:010-69418513，E-mail:13552137942@163．com收稿日期:2013-08-12;修回日期:2013-09-224期马秀玲等:吸光度法快速确定菌悬液浓度及其适用范围91［1］所以OD值和菌悬液浓度不成正比关系。本实1．2．3标准曲线的制作制备好的菌悬液浓度8验以大肠埃希菌为例，先用比浊法制成一定浓度大约为8×10cfu/g，取0．5mL稀释制备成4×8的菌悬液，稀释后得到不同稀释度的菌悬液，再