XX医院肾组织标本处理临床技术操作规范

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1、XX医院肾组织标本处理临床技术操作规范一、肾活检标本的初步处理为了保证迅速、及时、合适的分切组织，技术员必须到肾活检现场，并做好充分的准备工作。【准备工作】1.取一块纱布用生理盐水浸透，以拧不出水而乂潮湿为宜。纱布内放一块编好号的胶布（因胶布潮湿后不易写字），置人培养器皿内备用，每个肾穿刺患者，需分别准备一块这样的纱布。纱布不能太湿,否则肾组织浸在水中容易造成组织口溶；也不能太干，以免组织干涸,影响抗原性。两者均会影响染色效果。2.用一个清洁的5ml标本瓶，加入光镜固定液3ml（FAA固定液:甲醛溶液10ml,酸5ml,95%乙醇85ml混

2、匀）,盖塞紧后备用（以防乙醇挥发）。3.用一个清洁的5ml标本瓶，加入冷电镜固定液3ml[2.5%戊二醛10ml,双蒸憾水40ml,混匀后再加pH为7・4的磷酸缓冲液（PBS）50ml,冰箱内保存],置冰箱内备用。4.解剖显微镜一架，冰瓶一个。眼科手术平蹑一把，直尺•把,双面刀片一把，蜡板一块。5.上述光镜固定液小瓶、电镜固定液小瓶及培养皿均应在肾穿刺术数小时前准备完毕，并将其置于冰箱内备用。【取材判断】经皮肾活检术所获取的肾组织一般包括以下几种成分：皮质组织、皮髓交界组织以及皮质一髓质一皮质组织。穿刺取得肾组织后，立即用生理盐水冲洗数次以

3、除血迹。1.迅速判断所取组织是否为肾组织，还是其他类型的组织，如肌肉组织、结缔组织、脂肪组织等。1.当确定为肾组织后，立即将组织置于蜡板上，迅速测量其长度（mm）,并记录。2.用解剖显微镜或放大镜进行观察，以区别皮质和髓质，并仔细观察标本是否有肾小球。在解剖显微镜下，肾皮质色较淡，皮质区可见一些分布不规则，朦胧的红色小点，此即肾小球。使用解剖显微镜可大大帮助区别组织，作出正确的判断。但随着经验的积累，也可用肉眼判定。3.要使肾活检诊断的可靠，所取标本的量是至关重要的。如无肾小球或皮质部分少于1ml,要考虑再次穿刺，取得的组织要迅速分切后固定

4、。【标本分切】用国产18号Menghini型穿刺针（针长15cm,内径1.4mm）取得的肾组织粗细适屮，一次取得组织以1・5~2.Ocm为最佳。组织取出后用小银子将组织轻轻地夹到蜡板上，镜下观察，量出长度，用锐利的刀片将组织间隔切成1mm、2mni及4mm长的数段，分别供电子显微镜、免疫荧光、免疫酶标、光学显微镜检查用。首先分取电镜标本，要求组织少而精，取皮质区1mm长度即可，耍求肾小球至少1个；其次分配免疫病理检查所需组织，约2mm,要求肾小球至少3〜5个；其余组织留作光镜检查用，要求肾小球至少10个。【标本处理】1.免疫荧光及免疫酶标将

5、分切后的组织迅速放人事先冷藏的培养皿内的湿纱布屮，置人冰瓶立即送至恒温冷冻切片机内（〈一30°C）进行包埋、切片。如果不能马上切片，标本必须立即保存于一40〜一70~c低温冰箱内，以保持抗原活性，防止抗原移位或流失，但在低温冰箱内放置时间不宜超过2do2•光镜将分切后的组织平放在蜡板上，勿使其扭曲，用小锻子蘸少许光镜固定液于组织表而，30s左右使组织稍稍硬直后，再将整条组织放人固定液内。这样固定的组织平整、不易弯曲，便于切出完整的切片。3.电镜将分切后的组织立即放人2.5%戊二醛固定液中，置于冰瓶内送至电镜室。【注意事项】1.观察和分切标本

6、应在短时间内完成，并注意保持肾组织湿润,切勿使其干涸。2.在解剖显微镜下观察组织时，光线不宜太强，否则组织容易干涸，肾小球也不易看清。3.供免疫荧光检查用的肾组织应避免接触固定液，特别是含乙醇的間定液，以免影响冰冻切片检查结果。电镜固定液和光镜固定液不得互相混入。4.组织未经固定前，银子夹取组织的动作要轻，勿牵扯组织，避免人为因素造成组织细胞变形。肾活检标本光镜检查的制备技术【组织固定】1.固定液的选择进行组织学检查，一般用4%甲醛（即10%福尔马林）溶液，但是肾活检标本常常需要进行多种特殊检查及染色，因此应选择一种能够适用于各种特殊染色的

7、固定液。升汞一苦味酸混合固定，不但可以进行常规染色和各种特殊染色，还可进行酶标抗体染色。2.固定要求肾活检取得标本后，立即平铺在小蜡板上，迅速以锋利的刀片将组织按规定分配，并立即用I古I定液I古I定标木。如用戊二醛固定，固定时间最好不超过2h；如为多聚甲醛固定，时间稍长无妨。1.固定液配制⑴升汞一福尔马林(用时将a、b液混合，摇匀)a.饱和氯化汞4.5ml(1%NaCl)b.甲醛0.5ml(2)取2.5mlDb液，配方如下：80%饱和苦味酸乙醇溶液25ml纯乙醇220ml甲醛120ml蒸懈水50ml组织取好后，先放人升汞一福尔马林液中lOm

8、in左右，再将组织取出，放人Db液中固定。【前期处理】1.脱水处理75%乙醇10minX2次90%伊红乙醇lOmin95%乙醇lOmin优质无水乙醇10minX2次2.透明用擦镜