333人用狂犬病疫苗——细菌内毒素检查

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1、药品质量管理课程任务实施方案工作内容狂犬病疫l'l1成品质量控制-细菌内毒索检查班级指导教师时间地点一、供试品准备氯化钠注射液1瓶【质量标准】依法检查,每1ml中含内毒素量应小于0.5EU。二、器材准备1.铝饭盒6个2.玻璃离心管（带塞）30支玻璃离心管放在热冇纱布的铝饭盒中,200°C干烤60min，去除内毒素。3.封口膜若干4.细菌内毒素检查枪头（lOOOpl）200个5.细菌内毒素检查枪头（200Ml）200个工作准备注：最好为对立包装，几只枪头一袋。6.恒温水浴锅1台7.旋涡混合器1台&漂（8孔）6个9.200〜1000U1移液器（可调至500U1）6支10.50〜200

2、u1移液器（可调至100u1）6支11.一次性手套若干三、试剂准备1.细菌内毒素工作标准品10EU/支X3支2.细菌内毒素检查用水5ml/支X15支3.卷试剂0.125EU/支X150支1.供试品溶液制备最大有效稀释倍数是指在试验小供试品溶液被允许稀释的最大倍数，在操作方法不超过此稀释倍数的浓度下进行内毒索限值的检测。用以下公式來确定MVD：MVD=cL/X式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试品溶液的浓度；X为在凝胶法小嶺试剂的标示灵敏度(EU/ml),或是在光度测定法中所使用的标准曲线上最低的内毒素浓度。根据氯化钠注射液标准L为0.5EU/ml,选用蛍试剂的灵敏度为0.12

3、5EU/ml,则MVD=0.5/0.125=4制备方法：取供试品lml,加入玻璃离心管中，加入lml细菌内毒素检查用水，摇匀，得到供试品溶液(1/2)01ml供试品供试品溶液(1/2)1mlBET2.工作标准品准备将细菌内毒素工作标准品稀释为當试剂灵敏度的两倍(2X),即lOEU/ml〜0.25EU/ml(2X)o准备方法：取细菌内毒索国家标准品或工作标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂伦在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭示启开,启开过程屮应防止玻璃屑落入瓶内。加人适量细菌内毒索检查丿IJ水溶解，川封口膜将瓶口封严，置在旋涡混合器上混匀15分钟，然后按图稀释，每稀释

4、一步均应在旋涡混合器上混匀30秒钟。04ml0.5ml36mlBET0.5mlBETEo.53・供试品阳性对照溶液取0.2mlE](8入)加入玻璃离心管中，再加入0.2ml供试品溶液,即得含4入细菌内毒素的供试品溶液(1/2)。4.供试品细菌内毒素测定(1)蠻试剂原安甑8支,2支供试品管,2支阳性对照管,2支阴性对照管，2支供试殆阳性对照管。⑵加样8支賣试剂先加0.1mlBET水复溶，然后按下图加入相应的溶液,混匀。编号内毒索浓度/配制内:毒索的溶液平行管数A无/供试品溶液2B2入/供试晶溶液2C2入/检查用水2D无/检查用水2A：供试品B:供+阳性C：阳性对照D:阴性对照(3)

5、封闭管口，垂直放入37°C±rC适宜恒温器中,保温60min±2min。0.伽1含2入细菌内毒素0.1ml2入溶液的供试品濬液仆/4)0.伽1供试品溶港(1/4)0.1ml椅杳用水保温60分钟±2分钟后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性,供试品阳性対照溶液B的平行管均为阳性，阳性対照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。结果判定若溶液A的两个平行管均为阴性，判供试晶符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管屮的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否则判供试品不符合规定

6、。参考文件《中国药典》(2005版三部)附录刈E细菌内毒素检查法