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1、幸福活力海参饮料缓解体力疲劳功能研究报告2012年12月30“幸福活力海参饮料”缓解体力疲劳功能的研究报告正文1材料和方法1.1样品：幸福活力海参饮料，人拟用量为60ml/60kg-BW-H,受试物为棕色液体。1・2试验动物：18-22g雄性SPF级昆明种小鼠160只，由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，合格证号：SCXK（军）2009-00040289244。1.3实验动物饲养环境：SPF级动物实验室，合格证号:SYXK（津）2008-0004。动物房温度20〜25°C,相对湿度40-70%。饲料
2、由北京华阜康生物科技股份有限公司提供,生产许可证号:SCXK-（京）2009-0008。1・4试验方法1・4・1检测依据：《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）。1・4.2剂量设计及分组：幸福活力海参饮料，人拟用剂量为60ml/60kg•Bw•H,本试验设计了川个大组，分别用丁负重游泳试验、血清尿素氮、肝糖原及血乳酸测定。每组40只，每大组又分对照组及低、中、高三个剂量组（每组10只）,剂量分别为5ml/kg・BW、10ml/kg・BW、20ml/kg・BWo即相当于人拟用剂量的5倍、10倍、
3、20倍。低、中剂量组分别取幸福活力海参饮料内容物50ml和100ml，均加蒸憾水至200ml,充分混匀，高剂量组是用幸福活力海参饮料直接灌胃，灌胃量为0・2ml/10g・BW,对照组给予等量蒸憾水，各组经口灌胃，每□一次，连续给予30天后按1.6实验方法进行测定。1.5主要仪器：游泳箱,紫外可见分光光度计（TU-1810型）,全自动生化分析仪（TOSHIBATBA-40FR）,乳酸测定仪（YS12300STATPLUS）。1・6实验方法：1・6・1负重游泳试验：小鼠连续经口灌胃受试物30天，末次给予受
4、试样品30min后，将尾根部负荷5%体重铅皮，水深30cm,水温25°C,进行游泳试验，记录小鼠入水至力竭身亡时的游泳时间。1・6・2血清尿素氮测定：小鼠连续经口灌胃受试物30天，末次给予受违样品30min后，在30°C的水中不负重游泳90min,休息60min后从眼球处采全血，分离血清，然后用全自动生化分析仪进行尿素氮含量测定。尿素氮试剂盒购自北京九强生物技术有限公司。1.6.3肝糖原测定：小鼠连续经口灌胃受试物30犬，末次给予受试样品30min后处死动物，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取
5、肝脏100mg加入SmlTCA后每管匀浆1分钟,将匀浆液倒入离心管以3000转/分离心15分钟,取上清液lml放入10ml的离心管中每管加入95%的乙醇4讷充分混匀，用干净塞子塞上室温下竖立过夜，沉淀完全后将试管于3000转/分离心15分钟，倒掉上清液并使试管倒立放置10分钟，用加1的蒸徭水溶解糖原振荡直至完全溶解，将10ml蔥酮试剂用力加入各管，置冷水屮冲凉，达到冷水温度后，将其浸于沸水浴15分钟后，置冷水中冲凉，当所有试管都达到室温后，用紫外可见分光光度计在620nm波长卜•测定吸光度，计算肝糖原
6、含量。每］00g肝组织中的糖原（mg）_DU~DSXO-5XS1X100X0.91・6.4血乳酸测定：小鼠连续经】I灌胃受试物30犬，末次给予受试样品30min后采小鼠尾血约40nl,滴入已放入8u1破膜液（4u115%EDTA和4u12%SDS）的0.5mlEppendorf（Ep）管屮，充分混匀，冰浴保存。然后，将采血后小鼠放入30°C的水中不负重游泳lOmin后立即采血，休H20min后再次采血，三次的采血量及处理方法相同。然后用乳酸仪测定血乳酸。根据以下公式计算血乳酸曲线下面积:血乳酸曲线下面
7、积=1/2X（游泳前血乳酸值+游泳I；'Omin的血乳酸值）X10+1/2X（游泳后Omin的血乳酸值+游泳后休息20min的血乳酸值）X20=5X（游泳前血乳酸值+3X游泳后Omin的血乳酸值+2X游泳后休H20min的血乳酸值）。1・6・5实验数据统计：各组数据均采用SPSS11.5FORWINDOWS中方差分析进行统计分析，方差不齐者采用数据转换，如转换后仍不齐则采用非参数统计。2结果2・1受试物对实验小鼠体重的影响由表1〜4可见各剂量组小鼠实验初期、屮期、末期体重及增重与对照组比较，差异均无统
8、计学意义（P>0.05）。表1实验一组小鼠体重（g,均值土标准差）组别动物数初期休中期体重末期体重增重(ml/kg•BW)（只）对照组1019.3±0・527.9土1.239.5土2.020.2土1.81019.6土1.02&8±2.239.9±2.520.3±2.6201019.5±0.929.2±1.840.2±2.520.7±2.1表2实验二组小鼠体重（g,均值土标准差）组别动物数初期体中期体重末期体重增重(ml/kg•BW)（只）对照组1019.
