扶正愈瘤饮抗肿瘤的实验研究

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1、扶正愈瘤饮抗肿瘤的实验研究作者：韩世愈，朱宏，贾长茹，王秀霞【摘要】【目的】观察扶正愈瘤饮的抗肿瘤作用。【方法】取昆明种小鼠右腋皮下注射S180瘤株复制移植性实体瘤模型后，将荷瘤鼠随机分为6组，即模型组，扶正愈瘤饮低、高剂量组(中药低、高剂量组，剂量分别为2.4、12.4g/kg),顺钳组(剂量为8pg/d)，顺珀+低、高剂量中药组,连续给药10d;观察各组抑瘤率及生命延长率。取培养的卵巢癌细胞株SKOV3随机分为4组，即模型组，中药高、低剂量组及顺钳组，加药培养48h后，采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞凋亡情况。【结果】各给药组均可不同程度抑制荷瘤

2、鼠的肿瘤生长，莫中顺珀组与顺珀+中药组均可显著性降低瘤体质量(P<0.05或PV0.01),各屮药组及屮药与顺釦合用组均可显著性增加体质量(P<0.05或PV0.01)。中药与顺釦合用组均可增加荷瘤鼠存活时间(PV0.05),提高生命延长率。低、高剂量中药组均可诱导SK0V3细胞凋亡(P<0.05)o【结论】扶止愈瘤饮的抗肿瘤作用可能与莫能诱导肿瘤细胞凋亡有关，与化疗药顺珀合用具有一定的协同增效作用。【关键词】扶正愈瘤饮/药理学；卵巢肿瘤/中药疗法；细胞凋亡；细胞培养；疾病模型，动物；小鼠近年来，卵巢癌的治疗效果有了明显提高，肿瘤治疗观念也在变化。不仅注重致病因

3、素，更注重机体的反应性。这种新的治疗观念为中医药抗瘤研究提供了机遇。扶正愈瘤饮是临床经验用方，辅助恶性肿瘤手术、放化疗，使病人治疗期间的耐受性提高，生活质量明显改善。本实验通过动物模型观察扶正愈瘤饮的抗肿瘤作用。现报道如下。1材料和方法1.1动物和分组雌性昆明种小鼠153只，体质量(21土2)g,鼠龄8周。全部实验室饲养24h后，以S180瘤株0・2讥小鼠右腋皮下注射,复制移植性实体瘤的荷瘤鼠。第1部分45只，随机分为6组；第2部分108只，随机分为6组，每组18只。两部分均设模型组，扶正愈瘤饮低、高剂量组(中药低、高剂量组)，顺钳组，顺钳+低剂量中药组，顺钳+

4、高剂量中约组，除顺钳腹腔给药外，其他均灌胃给药，连续10do第1部分灌胃10d结束后处死取材进行抗肿瘤实验；第2部分灌胃10d结束后不处死，继续饲养用于生命延长试验。1.2扶正愈瘤饮的制备扶正愈瘤饮由海马、蛤蛤、生水蛭、熟地、紫河车、何首乌、制半夏、黄罠等10多种药物组成。按处方比例称取中药材，由黑龙江中医药大学第一附屈医院制剂室煎制，按人鼠体质量比换算后,低剂量、高剂量扶正愈瘤饮分别以2.4、12・4g/kg剂量灌胃。1.3主要试剂RPMI-1640培养液、四甲基偶氮卩坐盐(MTT)试剂盒、丿J豆素A(ConA).脂多糖(LPS)均为Sigma公司产品；酶联免

5、疫吸附(ELTSA)法试剂盒为Lifekey公司产品。1.4检测指标1.4.1瘤质量及抑瘤率将第1部分小鼠处死后剥离瘤组织称质量,计算各组瘤质量均值，按下列公式计算抑瘤率［11：p抑瘤二［5模型组-m给药组）/m给药组］X100%1.4.2生命延长率第2部分给药结束后常规饲养，观察小鼠一般情况和存活时间，按以下公式计算生命延长率［2］：p生命延长二［t存活,给药组-t存活，模型组）/t存活，给药组］X100%1.4.3细胞凋亡检测取出培养的卵巢癌细胞株SKOV3（购于中国科学院上海细胞生物所细胞库），以2.0X105个/讥的密度接种于96个孔板,每孔l.OmL,

6、随机分为4组：模型组、屮药高剂量组、屮药低剂量组、顺钳组，顺钳的浓度为20ng/mL,培养24h后更换含各组药物的培养基，培养48h后采用ELISA法测定450nn）处的吸光度（D）值，凋亡细胞越多，D值越高。细胞凋亡情况用富集系数（enrichmentfactor,IEF）表示:IEF二（D实验组-D本底）/D阴性对照组。其中本底指细胞裂解液，配制方法见参考文献［3］,阴性对照由试剂盒提供。将培养细胞制成单细胞悬液，取100HL细胞悬液，加入4.0UL染液，轻轻打匀后，取细胞悬液1滴滴在洁净的玻片上，加盖玻片后立即置荧光显微镜下观察。计数200个细胞，计算细胞

7、凋亡率：p凋亡二（n凋亡细胞/n总细胞）X100%1.5统计学处理采用SPSS11.0软件包进行。2结果2.1中药对S180实体瘤荷瘤小鼠的抑瘤作用表1结果表明，各给药组均可不同程度抑制荷瘤鼠的肿瘤生长，其中顺钳组、顺钳+低、高剂量中药•组的瘤体质量与模型组比较具有显著性差异（P<0.05或P<0.01）；各给药组与单用顺钳组比较，给药后体质量均增加（P<0.05或P<0.01）,表明扶正愈瘤饮除具抑瘤作用外，还可增加荷瘤鼠体质量。1.2中药对S180实体瘤荷瘤鼠的生命延长作用表2结果显示，顺钳+低、高剂量屮药组小鼠平均存活时间显著性高于模型组（P<0.05）,

8、而与单用顺钳组比较无显著