鸡小肠α-葡萄糖苷酶的提取及性质研究【毕业论文】

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1、本科毕业设计（20__届）生物工程鸡小肠α-葡萄糖苷酶的提取及性质研究摘要α-葡萄糖苷酶广泛存在于自然界的所有生物体内，种类繁多，性质各异。本实验用鸡小肠作原料，经过研磨，搅碎，制成粗酶液，在通过硫酸铵沉淀，透析，大孔树脂层析法提取α-葡萄糖苷酶。以4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷为底物，研究酶催化反应动力学。结果表明，该酶的最适温度范围在30℃~50℃，最适pH范围在6.0~6.5，α-葡萄糖苷酶的热温度性较差。Mg2+、Zn2+、和Fe2+对α-葡萄糖苷酶有激活作用，而Cu2+对α-葡萄糖苷酶有抑制作用。关键词：鸡小肠；提取；酶活力；α-葡萄糖苷酶ABSTRACTT

2、herearevariousα-glycosidaseofdifferentfeaturesexistinginallkindsofcreatures.Inthisexperimentchickenintestinalusedasrawmaterialisturnintocrudeenzymesbygrinding,pulperring,andthencrudeenzymesischangedintoprecipitationthroughammoniumsulfate.Atlastbymeansofdialysisandmacroporousresinchromato

3、graphyα-glycosidasecanbeextracted.PNPGcanbeusedtostudyEnzymecatalysisdynamics.Theresultsuggeststhatthisenzymesisactiveintemperature30℃~50℃,pH6.0~6.5butitshottemperaturethegenderispoorer.Mg2+、Zn2+、andFe2+haveactivationonα-glycosidase,whileCu2+hasinhibitoryaction.Keywords:chickenintestinal

4、;enzymeactivity;extraction;α-glycosidase目录1前言12材料与方法32.1仪器、药品、粗酶液、试剂的配制32.1.1仪器32.1.2药品32.1.3粗酶液的制备42.1.4磷酸缓冲液的配制42.1.50.5mol/LNa2CO3的配制42.2酶的提取42.2.1硫酸铵沉淀法42.2.2透析42.2.3大孔树脂吸附52.3标准曲线的制作62.4酶活力的测定62.5酶性质的研究72.5.1温度对α-葡萄糖苷酶的影响72.5.2金属离子对α-葡萄糖苷酶的影响72.5.3pH对α-葡萄糖苷酶的影响72.5.4α-葡萄糖苷酶的热稳定性73结果

5、与分析83.1标准曲线83.2不同饱和浓度的(NH4)2SO4沉淀法83.3大孔树脂吸附法83.4酶学性质的研究93.4.1温度的影响93.4.2金属离子的影响103.4.3pH的影响103.4.4酶的热稳定性104结论与讨论11I参考文献12I1前言α-葡萄糖苷酶（α-glycosidase，简称α-糖苷酶）是能够水解含糖苷键底物产生单糖的一类酶的总称。α-葡萄糖苷酶的相对分子质量一般在40000~150000[1.2]。不同来源的α-葡萄糖苷酶的相对分子质量差异很大。现在发现的所有α-葡萄糖苷酶的等电点pI都在酸性范围，并且变化不大，一般在3.0~5.0之间，但最适

6、pH值可以超过7.0[3]。α-葡萄糖苷酶的最适pH多分布在3.5~6.5，一般α-葡萄糖苷酶的稳定pH范围超过2个pH单位[3]。多数α-葡萄糖苷酶具有较高的热稳定性和最适温度[4]，不同来源的α-葡萄糖苷酶的热稳定性和最适温度有很大的差异。α-糖苷酶抑制剂可竞争性地抑制小肠内α-糖苷酶的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道内的吸收，从而有效地降低餐后血糖的峰值，调整血糖的水减少高血糖对胰腺的刺激，保护胰腺的功能。近年来的研究表明，α-葡萄糖苷酶抑制剂对预防和治疗糖尿病具有重要的作用,仅α-葡萄糖苷酶是一类能够从含α-糖苷键底物的非还原端催化水解α-葡萄糖基酶的总称，它可从低

7、聚糖类底物的非还原末端切开α-1，4糖苷键，释放出葡萄糖或将游离出的葡萄糖残基转移到另一糖类底物形成α-1，6糖苷键，从而得到非发酵性的低聚异麦芽糖[5-7]或糖酯、糖肽等,它是现今开发α-葡萄糖苷酶抑制剂类降糖药物的仿生实中必不可少的原料之一，它是国外近年来积极开发的一种优良的功能型食品添加剂和保健食品基料[8]。它具有预防龋齿等诸多的保健作用尤其是它能有效促进人体肠道内有益菌种—双歧杆菌的增值[9]，但国内均来自进口α-葡萄糖苷酶是酶制剂中一类很重要的品种，它能切开麦芽糖和麦芽低聚糖分子结构中α-1，4糖苷键，并能将游离出来的一个葡萄