卵黄抗体的研究进展【文献综述】

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1、毕业论文文献综述生物技术卵黄抗体的研究进展摘要：卵黄抗体仃gY)是从免疫禽蛋中提取出的针对特定抗原的抗体，它是一种具冇较强免疫功能的蛋白质，目前已被广泛应用于动物疾病的诊断及防治。木文对卵黄抗体的形成、性质、作用机理、分离捉纯方法及其在检测诊断上和疾病防治方面的应用情况进行了综述，可以预见，随着研究的进一步深入，卵黄抗体的应用将不断扩大。关键词：卵黄抗体；应用；研究进展0引言卵黄抗体(EggYolkImmunoglobauli简称IgY)指母鸡所产蛋的蛋黄中含冇的免疫球蛋白。卵黄抗体的研究始于19世纪末

2、至20世纪初丄，白1893年Klemperer首次报道鸡蛋屮存在抗体以来,人们对卵黄抗体(IgY)的研究越來越多，认识也越來越深入，应用也H益广泛。目前它已被广泛地川于许多疾病，尤其是近儿年來，在家禽传染病的防治上得到广泛应用。现阶段在卵黄抗体的形成、牛物学特性等方面已研究的比较清楚，并且卵黄抗体作为诊断试剂和防治药物的研究愈來愈受到关注。本文就卵黄抗体的形成、生物学特性、作用机理、提纯方法以及应用等作一综述。1卵黄抗体的形成禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫，分别受胸腺和法氏囊的控制。当机体受到外來

3、抗原刺激后，产生一系列免疫应答反应，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，浆细胞分泌大量特界性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体⑵3]2卵黄抗体的特性打哺乳动物相比，产蛋母鸡生产抗体具有快速、成本低、效率高、产量高的特点。有证据表明,卵黄原抗体对比哺乳动物原抗体冇更好的生物学优势⑷。IgY在结构上类似于哺乳动物的IgG,但在化学结构上有许多不同点。IgY的分了量为180kDa,即67-70kDa的重链和22-30kDa的轻链,沉降系数为7S,等电点接

4、近5.2⑸。而IgG分子量为150kDa,即50kDa的重链和22〜23kDa的轻链。惣Y由于结构中比TgG重链多了一个恒定区，但却没有I或特有的钞链区，所以IgY的摆动性、柔韧性下降，但IgY的分子量较IgG大，所以稳定性较高。IgY具有较强的耐热、耐酸能力，在PH4〜9的环境中稳定，在65°C下可保持活性24h以上。与哺乳类IgG相tL,IgY有更多的疏水性分子，这恰好使它更适于脂类含量丰富的卵黄环境⑹。卵黄抗体IgY相对于传统哺乳动物的抗体IgG具有以下优点：（1）IgY不与哺乳动物补体、Fc受休

5、结合，也不与葡萄球菌蛋口A（SPA）或链球菌蛋白G（SPG）结合；TgY还不与血清屮的类风湿因子（RF）结合，因而用IgY检测可避免假阳性结果，提高免疫学检测的准确性⑵。（2）产生免疫反应所需的抗原剂量小，由于禽类与哺乳动物在种系发生史上距离较远，IgY抗体与抗原亲和力高，产生有效免疫应答所需的抗原剂量较小，且不易与哺乳动物的免疫球蛋白发生交叉反应[6Jc（3）每个蛋大约含100吒以上的TgY,—个月可达3g,相当于兔子的10-20倍；卵黄中没有其他的Tg,易于提纯⑸。（4）在实际生产中，动物的采血不仅

6、对动物本身是极大的应激，而且费时、费工，大规模生产是不切实际的，而利用蛋鸡生产抗体要方便的多Ujo3卵黄抗体的作用机理特定病原菌的卵黄抗体能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原细胞的完整性，直接抑制病原菌的生氏；卵黄抗体可黏附于细菌的菌毛上，使Z不能黏附于肠道黏膜上皮细胞；一部分卵黄抗体在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片段含有抗体的可变小肽（Fab）部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原菌黏附因了结合，使病原菌不能黏附易感细胞而失去致病性，而IgY的稳定区（Fe部分）留在肠内

7、⑺。4卵黄抗体的分离、提纯方法卵黄屮的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：20人部分蛋白质都是脂蛋白质，存在于卵黄颗粒屮，不溶于水，只有卵黄球蛋口（a、B、y）是水溶性的，而IgY是丫卵黄球蛋白。因此IgY的分离纯化首先需有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋白中分离8Y⑷。4.1卵黄抗体的粗提近二I-几年来，已建立了许多较为高效而经济的方法，如聚乙二醇沉淀法、氯仿抽提法、水稀释法、辛酸沉淀法（CA法）等。4.1.1聚乙二醇（PEG）沉淀法PEG是非离子型水溶性聚合物，高浓度不引起蛋白质变性，沉淀吋间比硫酸

8、钗和乙醇都短，不影响离心处理。该法垠早由Polson报道“。一般用PBS或TBS作缓冲液将卵黄液稀释5倍，加入3.5%的PEG6000或硫酸葡聚糖，10000r/niin低温离心25n)in后取上清，可得卵黄抗体粗提物。4.1.2氯仿抽提法Ntakarutimana在的蛋黄液屮加入40mLTBS和40mL氯仿，以10000r/min低温超速离心25min后保留水层。中间层再用40mLTBS萃収一遍。两步得到的水层均为WSF。有些人还用丙酮作