卵黄囊抗体制备及其应用研究进展

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1、卵黄囊抗体制备及其应用研究进展【关键词】卵黄囊抗体　　卵黄囊抗体即卵黄免疫球蛋白(EggYolkImmunoglobulin，IgY)是抗原免疫禽类后由卵黄中分离得到的特异性抗体。与哺乳动物来源的IgG比较，卵黄囊抗体具有取材方便、分离纯化方法简单、产量高，同时具有特异性高、稳定性较好等优点，在疾病诊断、防治等诸多方面得到了广泛的应用，一直是生命科学相关科研领域的研究热点。本文就卵黄囊抗体的分离纯化方法及其应用研究进展作一综述。　　1卵黄囊抗体的基本结构及其性质　　与哺乳动物血清免疫球蛋白相似，卵黄囊抗体的基本结构包括2条轻链和2条重链，分子量约为180kD。卵黄囊抗体的疏水性大于IgG。L

2、ee和Kim等〔1,2〕研究表明，卵黄囊抗体具有良好的稳定性，对pH及酶等作用引起的失活效应有较强的抵抗力。　　2卵黄囊抗体的制备　　21实验动物的免疫Schantiene〔4〕用仙台病毒免疫产蛋母鸡，收获高免鸡蛋。以TBS作为缓冲液，将卵黄液稀释4倍后，加入35%的聚乙二醇6000，沉淀脂类，卵黄囊抗体保留在上清液中。应用这种方法从每毫升卵黄液中获得约45mg的特异性卵黄囊抗体，纯度达95%。　　223有机溶剂抽提法脂类易溶于有机溶剂，可采用氯仿、丙酮等有机溶剂进行分离。用经TBS冲洗过的鸡蛋黄制成15ml蛋黄液，加入40mlTBS充分混匀后加入40ml氯仿，冷冻离心，分三相。弃去氯仿层，

3、保留水层，中间的半固体相用40mlTBS萃取，取水层，与前一步水层合并即为水溶性组分。　　224天然胶法一些天然胶如卡拉胶和黄原胶等可用于卵黄抗体分离。将9倍体积的01%(等〔5〕比较了几种去污剂包括阴离子、阳离子和非离子型去污剂，发现用溴化十六烷基三甲铵进行分离，脂类的残留量不足3%，而用十二烷基磺酸钠分离残留量最高，为14%～35%。用非离子型去污剂辛苯聚醇8(TRITON.RTM.X114)分离时，蛋白回收率可达85%～95%。Stalberg等〔6〕利用TX100进行分离，蛋白回收率可达97%。　　227超临界气体提取法该法的基本原理是在高压下二氧化碳液化，将卵黄中的脂溶性物质溶解在

4、其中，并随气流带走。将卵黄粉末装入超临界气体抽提装置，通入300kg/cm2，40℃二氧化碳超临界气体与卵黄粉末混合，在60kg/cm2，40℃的减压条件下，被抽提出的杂质与超临界气体分开而进入分离室，即可得到去除脂类的卵黄粉末。将去脂的卵黄粉末溶于20倍磷酸盐缓冲液中，搅拌，离心，即可得水溶性组分。　　23卵黄囊抗体的提取方法提取的目的是将大量卵黄囊抗体从水溶液中分离出来，得到卵黄抗体。目前主要通过超滤法或沉淀法来实现。沉淀法所用的沉淀剂包括无机物、有机物或有机溶剂，也可以采用多种方法联合沉淀，或者沉淀法和超滤法相结合的方法提取卵黄囊抗体。　　231超滤法超滤法具有浓缩、除盐、分级和纯化作

5、用。卵黄囊抗体的分子量约为180kD，在提取时可采用截流值为100kD的超滤膜。研究表明，在水稀释法分离后经硫酸钠沉淀，超滤，回收率为98mg卵黄囊抗体/ml蛋黄，纯度94%。超滤法具有所需设备较简单、操作方法简便等优点，适合大规模工业化提取卵黄囊抗体。　　232无机物沉淀法向含有卵黄囊抗体的水溶液中加入无机盐或无机盐过饱和溶液，使卵黄囊抗体在高盐条件下盐析。常用的无机盐有硫酸钠和硫酸铵。Kritratanasak等〔7〕利用硫酸铵盐析法成功获得较高纯度的抗鼠IgG卵黄抗体(IgYantimouseIgG)，每个鸡蛋可收获约40mg卵黄囊抗体。采用无机盐沉淀后所得固体，一般需经半透膜透析以除

6、去残留的盐分。Ko和Ahn〔8〕比较了硫酸铵沉淀法及离子交换法，结果发现，前者所制备的卵黄囊抗体纯度高于后者，而且适合于大量样品的制备。　　233有机物及有机溶剂沉淀法Polson最初的PEG法采用终浓度为35%的PEG6000对卵黄进行分离获得水溶性组分，用12%PEG进行沉淀，沉淀物经磷酸盐缓冲液溶解后再用12%PEG沉淀，得到卵黄囊抗体。之后，Polson〔9〕对此方法加以改进，先后经12%PEG和-20℃的50%乙醇两步沉淀法获得卵黄囊抗体，蛋黄回收率49mg/ml，纯度89%。卵黄囊抗体的提取一般采用联合沉淀法，即利用不同的沉淀剂对水溶性组分经过2次或多次沉淀，从而获得纯度较高的卵

7、黄囊抗体。　　24卵黄囊抗体的纯化方法为了满足不同的使用目的，许多情况下需对提取的卵黄囊抗体进一步纯化，除去其中的杂蛋白、盐或其他杂质，获得高纯度的卵黄囊抗体。目前主要采用层析方法纯化卵黄囊抗体，包括凝胶过滤层析、离子交换层析以及亲和层析等。　　241凝胶过滤层析主要利用具有网状结构的凝胶分子筛作用，可根据被分离物的分子大小不同选择不同的凝胶介质进行层析。卵黄囊抗体纯化时，常用交联葡聚糖作为凝胶层析介质。研究