13 生物化学实验--酶的专一性及影响酶活性的因素

《13 生物化学实验--酶的专一性及影响酶活性的因素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、酶的专一性及影响酶活性的因素【目的】1．掌握验证酶的专一性及温度、pH、激动剂和抑制剂对酶活性影响的实验方法。2．熟悉验证酶的专一性及温度、pH、激动剂和抑制剂对酶活性影响的实验原理。3．了解实验设计的对照原则。【原理】唾液淀粉酶只能催化淀粉水解，最终产物为麦芽糖，而不能催化其它糖如纤维素和蔗糖等水解。蔗糖与淀粉均无还原性，与班氏试剂呈阴性反应，而麦芽糖和蔗糖的水解产物葡萄糖和果糖皆可与班氏试剂呈阳性反应，即在一定条件下使二价铜还原为一价铜生成砖红色沉淀。淀粉水解程度不同，遇碘呈色反应不同，因此可以通过呈色反应了解淀粉水解的程度，从而判断唾液

2、淀粉酶活力的大小。淀粉水解及遇碘呈色反应如下：【器材】1．恒温水浴2．电炉3．烧杯4．微量移液器5．试管6．漏斗7．量筒8．容量瓶9．冰浴【试剂】1．1%淀粉溶液2．1%蔗糖溶液3．1%氯化钠溶液4．1%硫酸铜溶液5．1%硫酸钠溶液6．1∶10稀释的新鲜唾液把铺适量棉花的漏斗放在小量筒上，收集过滤的唾液2ml，再用蒸馏水稀释唾液到20ml混匀备用。7．班氏（Benedict）试剂称取柠檬酸钠173g及无水碳酸钠100g溶于700ml蒸馏水中，加热促溶，冷却后慢慢倾入17.3%硫酸铜溶液100ml，边加边摇，再加蒸馏水至1000ml，混匀。如混

3、浊可过滤取滤液备用，此试剂可长期保存。8．I-KI溶液将碘10g及碘化钾20g溶于100ml蒸馏水中为贮存液，使用前稀释10倍。9．不同pH缓冲液取28.40gNa2HPO4溶于少量蒸馏水，移入1000ml容量瓶内，稀释至刻度为A液；取21.01g柠檬酸溶于少量蒸馏水中，移入1000ml容量瓶内，稀释至刻度为B液。按下表分别吸取一定量的A液和B液，配置出所需的不同pH缓冲液。pHA(ml)B(ml)5.06.88.010.3015.4519.459.704.550.55【操作】（一）唾液淀粉酶的专一性取4支试管，编号，按下表操作。试剂（ml）

4、12341%淀粉溶液1%蔗糖溶液稀释唾液蒸馏水1.0—1.0—1.0——1.0—1.01.0———1.01.0混匀，37℃，保温8分钟班氏试剂1.01.01.01.0混匀，沸水浴，保温2分钟观察记录颜色(二)温度对唾液淀粉酶活性的影响取5支试管，编号，按下表操作。试剂（ml）123451%淀粉溶液保温5分钟稀释唾液保温8分钟保温8分钟碘液(滴)2.037℃1.037℃—12.0100℃1.0100℃—12.0100℃1.0100℃37℃12.00℃1.00℃—12.00℃1.00℃37℃1观察记录颜色(三)pH对唾液淀粉酶反应速度的影响取3支

5、试管，编号，按下表操作。试剂（ml）1231%淀粉溶液缓冲液2.02.0（pH5.0）2.02.0（pH6.8）2.02.0（pH8.0）稀释唾液1.01.01.0混匀，37℃，保温5分钟碘液（滴）222观察记录颜色(四)激动剂和抑制剂对唾液淀粉酶的影响取4支试管，编号，按下表5操作。试剂（ml）12341%淀粉溶液1%NaCl溶液1%CuSO4溶液1%Na2SO4溶液蒸馏水稀释唾液1.00.1———0.51.0—0.1——0.51.0——0.1—0.51.0———0.10.5混匀，37℃，保温3分钟碘液（滴）1111观察记录颜色【注意事项】

6、1．每次加试剂后都要摇匀，碘液不可滴在管壁上。2．加碘液要迅速，以保证反应时间相等。3．保温100℃的管应先冷却再加碘液，其它各管均应置于相应温度下或取出后立即加碘液摇匀。【思考题】1．唾液淀粉酶能否水解蔗糖？为什么？2．温度及pH对唾液淀粉酶活性各有何影响？为什么？3．唾液淀粉酶的激活剂及抑制剂各是什么离子？为什么？