关于鲎试剂在细菌内毒素检查法中使用的探讨

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1、关于逼试剂在细菌内毒素检查法中使用的探讨卷试验因其简单、快速、灵敬、准确的特点，被壯界各国广泛采用，中国药典和欧美药典将其定为法定的细菌内毒素检杳法，人范围地替代了热源检杳法。为了确保英检杳结果的准确性，本文对賞试剂的使用进行了探讨，以规范凳试剂的正确使用。[关键词]蛍试剂;细菌内毒素检査法[Abstract]TALreagenttestbecauseofitssimple,fastandaccuratecharacteristicswaswidelyadoptedaroundtheworld.ChinesePharmacopoeia,EuropeanandtheUnitedState

2、sPharmacopoeiasetitasthestatutorybacterialendotoxinstest,replacesthepyrogentestonalargescale.Inordertoensuretheaccuracyoftestresults,themaindiscussionofthispaperistheuseoftachypleustridentatusleach(TAL),toregulatetheproperuseofTAL.[Keywords]TAL;bacterialendotoxinstest1蛍试剂的分类蛍试剂是从栖生于海洋的节肢动物“卷”的蓝色

3、血液屮提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。1.1按原料来源分一种是由美洲餐血液提取的称美洲餐试剂(LimulusAmebocyteLysate),缩写为LAL,山美国生产;另一种是山东方養血液中捉取的称东方省:養试剂仃achypleusAmebocyteLysate),缩写为TAL。TAL与LAL有相同的功效。1.2按实验方法分细菌内毒素检查法包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者乂包括浊度法和显色基质法口]。则堂试剂可分为：凝胶法卷:试剂、动态浊度法卷:试剂、终点浊度法堂试剂、动态显色法堂试剂和终点显色法愛试剂。凝胶法卷试剂通过与内毒素产生凝集反

4、应的原理來定性检测或半定量内毒素的方法。动态浊度法卷试剂、终点浊度法卷试剂、动态显色法卷试剂利终点显色法卷试剂则都是定量检测内毒素的。1.3按使用特点分1.3.1普通逬试剂灵敏度0.5〜0.125EU/mL适用于仅需要检测内毒素限量的样品。1.3.2高灵敏度卷试剂灵敏度0.06-0.015EU/ml,适用于内毒索限量较低的样品细菌内毒索检查。1.3.3特异性卷试剂灵敏度0.5〜0.015EU/ml,适用于成分较为复杂，会对蛍试剂产生干扰的样品[2]。1.3.4定量法當试剂授低检测限0.03〜0.005EU/ml,适用丁•需要对内毒素进行定量测定的样品。2賞试剂在细菌内毒素检查法中的正确

5、使用内毒素检查法结果准确打否打所用卷试剂的灵墩度相关性很人[3],而卷试剂的灵墩度均它的正确使用乂密切相关。所以，一定要严格执行蛍试剂的质量标准，规范使用蛍试剂。2.1保证所使用賞试剂的质量當试剂的质量主耍表现在其灵敏度、自凝时间与成胶状态三个方面：灵敏度稳泄泊凝时间不低于24h[4];具有…定的缓冲能力与合适的pH;反应后即形成坚实凝胶，将成胶安甑翻转180。而不会被破坏。而质盘稍差的盛试剂存放一定时间后(如半年)其灵敏度可能发生变化，而灵敏度的改变会使测定结果所反映的供试品中内毒索的允许限值发生变化[5]oW此,需选择具有国家颁发的批准文号,质量稳定的卷试剂。2.2对卷试剂灵敏度进

6、行监测性复核山于不同厂家卷试剂质量不尽相同，即便是相同厂家不同批号的彊试剂也有差异，这便导致淤试剂灵敏度复核值与标示值不尽一致,因此機试剂的复核值对检测结果有显著影响⑹。每使用新批号蠻试剂时应复核其灵敏度;对留样卷试剂自生产Z日起，每6个月进行一次灵敏度检测，其灵敏度在冇效期内应符合规定。冇研究衣明，蛍试剂的灵敏度在符合标准规定及适当的贮存条件下,3年内其灵敏度变化不人，是稳定的。建议可适当延长其有效期［7,8］。因此，对堂试剂灵敏度进行-监测性复核有利于确保实验的准确性，同时可以最大程度地使用愛试剂。2.3使用过程正确操作选择合适的操作方法与顺序，在卷试剂的使用过程中尤为重要。在操作

7、过程中要注意以下儿点：（1）实验室要求洁净、无尘埃流通;检验人员同时注意卫生的保持。在整个使用操作过程中应防I匕微生物的污染，例如空气的流动，人员的口沫、汗液污染等。（2）賞试剂开启、溶解和配制时应尽量避免将安瓶外瓶壁脏物、瓶壁碎片、砂轮锯屑等异物混入娥试剂屮，避免蛍试剂外损。（3）徵试剂屮含冇多种蛋白质，用力振摇会产生气泡，一旦起泡难以消除，而影响检测的准确性，所以在整个操作过程中都要轻力以避免因过分震动而引起的误差。（4）量取和加样反应物时