一株袋鼠源志贺氏菌的分离鉴定

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1、一株袋鼠源志贺氏菌的分离鉴定耿长国1,彭广能1*,何春燕1,刘沙2,石锦江1,马晓平1(1•四川农业大学动物科技学院临床兽医系，四川雅安625014；2.辽宁省东港市银河路22号东港出入境检验检疫局)摘要：本实验室在从事临床工作中，从一只死亡袋鼠的内脏器官中分离得到一株细菌，经细菌培养、形态学观察和生化特性鉴定，初步鉴定为志贺氏菌，并且经对小鼠致病性实验证明该株菌具有强致病性。志贺氏菌(Shigella),是一类革兰氏阴性、不活动、不产生抱子、无荚膜、无鞭毛、多数有菌毛的杆状细菌，可引起人和其他哺乳类动物的细菌性痢疾。根据其抗原构造的不同，可

2、分为四个种，即称痢疾志贺氏菌(Sh.dysenteriae)>福氏志贺氏菌(Sh.flexneri)^鲍氏志贺氏菌(Sh.boydii)、宋内氏志贺氏菌(Sh.sonnei)o该菌为兼性厌氧菌，能在普通培养基上生长，形成中等大小，半透明的光滑型菌落。在肠道杆菌选择性培养基上形成无色菌落。分解葡萄糖，产酸不产气。VP试验阴性，不分解尿素，不形成硫化氢，不能利用枸椽酸盐作为碳源。宋内氏志贺氏菌能迟缓发酵乳糖(37°C3〜4天)。本实验室于2007年5月从一只病死的袋鼠身上分离得到一株志贺氏菌，现将分离鉴定过程叙述如下：1材料与方法材料立式高压蒸气

3、灭菌器、显微镜、冰箱、超净工作台、恒温培养箱。1.1.2培养基血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基。1.1.3生化实验用试剂肠杆菌科细菌牛化常规微量鉴定管，购自浙江省军区后勤部卫牛防疫检验所。1.1.4病料及来源病料來源于四川某野生动物园的一只病死的袋鼠。无菌采其心、肝、脾、肺、肾、淋巴结和关节囊液用于细菌的分离鉴定。1.2方法1.2.1分离培养在超净工作台内，首先用刀片烧烙各病料组织表面，然后于烧烙处切开组织并用接种环沾取深部组织于血琼脂培养基划线培养，于37°C恒温箱中培养24h,观察菌落生长情况、形态和颜色

4、。之后挑取血琼脂培养基上的单个菌落划线接种于麦康凯、伊红美蓝、SS琼脂培养基，于37°C恒温箱进行培养，观察菌落生长情况、形态和颜色。1.2.2形态学检查分别挑取血琼脂、麦康凯、伊红美蓝、SS琼脂培养基上的单个菌落进行涂片、染色、镜检。1.2.3牛化特性鉴定糖发酵及生化反应按常规进行⑴。1.2.4致病性将6只健康小鼠随机分成两组，1组每只腹腔注射0.2ml纯细菌培养物，2组每只腹腔注射0.2ml生理盐水，将两组分笼隔离饲养，1〜2d观察其发病死亡情况。2结果2.1死亡袋鼠临床症状及病理剖检变化作者简介：耿长国(1983-)辽宁省丹东凤城市人，

5、男,满族，在读硕士。*通讯作者：彭广能(1966-)E-mail:pgn.sicau@163.com,男，土家族，在读博士，硕士生导师。该袋鼠病程约两周，这一期间临床症状主要表现为体温升高、食欲不振、咳血、腹泻和关节囊肿大。剖检变化主要表现为肺脏大面积淤血、四肢关节囊肿大，关节囊内积有大量清亮液体和淋巴结肿大。2.2分离培养结果37°C培养18~24h后，接种肺、关节囊液和淋巴结病料的血琼脂培养基上长出圆形、微凸、光滑湿润、灰白色、半透明、边缘整齐的菌落。该株菌在麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基均能生长，为无色菌落。据此结

6、果可初步判断为志贺氏菌属。2.3形态学观察分别将在血琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、SS琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基平板上培养16〜18h的新鲜菌落涂片经革兰氏染色镜检，为无芽胞，无荚膜，革兰氏阴性短杆菌。2.4生化实验结果检验项目葡萄糖结果+—乳糖蔗糖一鼠李糖一甘露醇+卫矛醇一V—P试验一枸椽酸盐腺酶明胶硝酸盐还原+靛基质+甲基红+赖氨酸脱竣酶一鸟氨酸脱竣酶一注：“+”为阳性，“一”为阴性。据此结果，该株菌能分解甘露醇，但不能分解乳糖可将该株细菌判定为福氏志贺氏菌或鲍氏志贺氏菌［2］。2.5致病性实验结果感染组小鼠在注射12h后开始有发病迹

7、象，并且在18h内全部死亡。将小鼠解剖后，各脏器无明显病变。分别取死亡小白鼠的肺、肝、脾组织接种麦康凯培养基。培养所得菌经鉴定与注射用感染细菌相同。3讨论3.1由于各种因素，本实验室未能对分离菌株做进一步血清学凝集试验，确定菌群和菌型。同时也未能对死亡袋鼠进行相关病毒等其它病源微牛物的分离。但是就该株志贺氏菌对小鼠的强致病性、袋鼠的临床症状和病理剖检变化来看，可判定该株志贺氏菌是引起袋鼠败血症，最终导致其死亡的重要原因。3.2据国内综合资料,志贺氏菌属在我国感染性腹泻病原菌中居首位。人类对志贺氏菌有很［2］高的易感性。在幼儿可引起急性中毒性菌

8、痢，死亡率甚高。对野生动物的致病性少见报道，特别是袋鼠，之前国内几乎没有关于袋鼠感染志贺氏菌而死亡的报道。鉴于此，我们冇必要提高对袋鼠感染志贺氏菌的重视，提出有效的