第3章 高效液相色谱分析

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1、仪器分析第三章高效液相色谱分析High-PerformanceLiquidChromatography，HPLC3.1高效液相色谱法的特点3.2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素3.3类型及分离原理3.4高效液相色谱法的应用目　录仪器分析学习指导(四年制)第三章高效液相色谱分析高效液相色谱法（HPLC）是20世纪60年代末发展起来的一种新型分离分析技术，已成为化学、生物化学与分子生物学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术。它在技术上采用了高压泵、高效（化学键合）固定相和高灵敏度检测器，具备高压、高速、高效的特点。仪器分析学习指导(

2、四年制)第3章高效液相色谱分析3.1高效液相色谱法的特点仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析固定相——柱内填料或固定液流动相——洗脱剂HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。液相色谱的基本原理仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析液相色谱的特点：流动相为液体增加高压泵、梯度洗脱装置通常在室温下操作分子扩散小粘度、密度大，传质阻力大温度高易产生气泡流动相的组成随时间而改变仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析操作基本流程1高压输液系统2进样系统3色谱系统4.检测

3、器4检测系统仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析流动相的组成随时间而改变仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析高效液相色谱仪高效液相色谱仪仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析高效液相色谱与气相色谱的对比相同点：基本原理、基础理论相同不同点：分析对象、流动相、操作条件的差异仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析气相色谱法高效液相色谱在较高温度下进行在室温条件下进行高压仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析高效液相色谱与气相色谱的比较气体和沸点较低的化合物,占有机物总数的20％高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的

4、物质,占有机物总数近80％流动相是惰性气体无毒，易处理，运行和操作容易流动相是不同极性液体；流动相有毒，费用较高项目高效液相色谱法气相色谱法进样方式样品制成溶液样品需气化或裂解分离原理吸附,分配,筛析,亲和等吸附和分配检测器紫外光度检测器、荧光检测器等热导池检测器等应用范围低、中、高沸点有机化合物,离子型无机化合物,热不稳定化合物生物活性分子低沸点有机化合物,永久性气体高效液相色谱与气相色谱的比较仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析固定相流动相1传质快2寿命长3耐水、耐光、耐有机溶剂，稳定4选择性好5有利于梯度洗脱1样品有合适的极性和良好的选择性

5、2与检测器匹配3高纯度4化学稳定性好5低粘度（粘度适中）仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析3.2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析基础理论热力学理论：塔板理论——平衡理论动力学理论：速率理论——Vander方程在高效液相色谱中,液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计，即：H=A+Cu◆液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同。仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析◆液体的粘度比气体大100倍，密度为气体的1000倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。

6、◆由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。◆液相色谱中不可能通过增加柱温来改善传质。恒温。◆改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。1选粒径小的、分布均匀的球形固定相（dp≤10μm）2选粘度小的流动相。3在一定范围内减小流速。4选室温250C左右5提高装柱技术，能使涡流扩散项减小，提高柱效。仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析液相色谱分离的条件：谱峰扩展（谱峰展宽）柱内展宽因素涡流扩散传质阻力（主要因素）柱外展宽因素进样器、连接管检测器体积仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析3.3高效液相色谱法的类型及分离原理仪器分析学习指导(

7、四年制)第3章高效液相色谱分析高效液相色谱法液液分配色谱液固吸附色谱离子交换色谱离子对色谱空间排阻色谱一、液固吸附色谱法（LSC）流动相为液体，固定相为固体吸附剂仪器分析学习指导(四年制)第3章高效液相色谱分析固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂。流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。二、液液分配色谱法（LLC）固定相与流动相均为液体（互不相溶）固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法）化学键合相

8、：通过化学反应键合到硅胶表面正相色谱——固定液极性>