[精品]保肝功能研究试验方案

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1、保肝功能研究试验方案1、木瓜提取物：木瓜中齐墩果酸最佳提取参数为95%的乙醇、温度为60°C、时间3h、料液比为1:8、原料粒度40口、提取2次。熊果酸最佳提取参数为95%的乙醇、温度为60°C、时间3h、料液比为1:6、原料粒度60目、提取2次。用HPLC检测出的齐墩果酸与熊果酸的含量分别为：0.59%和0.12%2、乙醇肝损伤的方法：将小鼠随机分为乙醇对照组（n=6）和高（n=4）、低齐I」量（斤=7）木瓜提取物预防组.乙醇对照组每日下午定时白酒灌胃6mL/kg;高、低剂量SAM预防组每日上午定时分别肌注SAM32和16mg/kg,下午定时口酒灌胃6mL/kg.实验两组连续给

2、酒25和26d取血作酶学检测并处死所有大鼠取肝脏制作右蜡切片,HE染色病理学观察.血清Y-谷氨酰转肽酶（y-glutramyltranspeptidase,y・GT,酒精•性肝炎或酒精性肝硬化患者GT几乎都上升，为酒精性肝病的重要特征）出第四军医人学口腔医院检验科检测.态参量（56度北京二锅头）实验方案（改进）：高剂量组：240mg/Kg->0.2ml24mg/ml药物低剂量组：60mg/KgT0.2ml6mg/ml药物配制:用56度酒配制即可,共配50ml.方法：实验前，每只老鼠称重（编号）。酒与药同吋于每天上午。空口对照8只，不喂药和酒，只喂饲料和水；模型组：喂0.2ml酒，

3、自由釆食和水。药物组：1）高剂量组：喂0.2ml24mg/ml药物，口由采食和水；2）低剂量组：喂0.2ml6mg/ml药物，自曲采食和水；连续喂养20天后，称重，眼眶取血（分离血清，测定GT酶活性），称器官重，取肝，用4%甲醛固定后进行石蜡切片观察。3、CCh肝损伤的方法：第一种方法：SD小鼠随机分为8组（正交配伍1〜8组），每组6只,各组动物各按相当生药lOgkg-1灌胃给予相应的部位配伍液或蒸憎水，连续给药5d,ld1次。于末次给药2h后,参照文献方法，按7mLkg-1给各组大鼠一次性腹腔注射10%的CC14P植物油溶液，造成大鼠急性肝损伤模型。24h后，各组大鼠以10%水

4、合氯醛麻醉，颈动脉取血，分离血清,用赖氏法检测血清中ALT、AST的含量。给予CC14后24h小鼠摘眼球取血,2500rPmin离心15min分离血清，用全自动生化分析仪（西班牙）测定血清中ALT、AST活力。实验方案（改进）：高剂量组：240mg/Kg->0.2ml24mg/ml药物低剂量组：60mg/KgT0.2ml6mg/ml药物配制：用1%Tween-80配制即可，各配20ml.方法：实验前，每只老鼠称重（编号）。空白对照8只，不喂药，自由喂饲料和水；模型组：不喂药，自由采食和水。约物组：1）高剂量组：喂0.2ml24mg/ml药物，口由采食和水；2）低剂量组：喂0.2m

5、l6mg/ml药物，自曲采食和水；连续喂养7天后，末次喂药后，对模型组和药物组的老鼠分别从尾静脉注射XmlCCb，24h后称重，眼眶取血（分离血清，测定ALT,AST酶活性）,称器官重,取肝，用4%卬醛固定后进行右蜡切片观察。注意：对照组测定时应测GT、ALT、ASTo预试：用空片老鼠从腹腔分别注射100（11,20

6、il,2

7、il10%的CC14（用色拉油配制）。24h后取血测定ALT、AST的活性是否增加。体重、心、肝、脾、肾的重量取肝脏，称重并计算肝脏系数[肝脏系数=肝脏重量（g）P空腹体重（g）X100]0取肝左叶用体积分数4%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，用LEICA石蜡切

8、片机（德国）制做组织切片，姬姆（HE）染色，显微镜下观察肝脏病理组织学变化。4、D•半乳糖胺肝损伤的方法第二种方法：取红丝线草，剪成粗段，分别用95%乙醇和水冋流提取,浓缩蒸干得醇提物和水提物。醇提物用适量水悬浮后依次用石油醯、水饱和的醋酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，各部分萃取液浓缩得到不同极性部位浸膏。精密称取所需浸膏,用纯化水配成20g・kg・l（按生药材计算），备用。大鼠随机分成12组，每组8只。分别为肝炎模型组（A）、正常对照组（B）、乙肝宁组（C）、联苯双酯组（D）、石油瞇高剂量组（E）、石油瞇低剂量组（F）、醋酸乙酯高剂量组（G）、醋酸乙酯低剂量组（H）、正丁醇高剂量组

9、（I）、正丁醇低剂量组（J）、水高剂量组（K）、水低剂量组（L）。正常对照组和病理模型组每天灌胃给予纯化水，受试组和阳性对照组的动物每天根据剂量灌胃给药。在给药的第5天，除止常对照组外，其余各组动物均腹腔注射D■半乳糖胺,继续给药至第7天，于第8天从股动脉取血，离心，分离血清测定ALT、AST等生化指标，进行统计学计算;处死动物取肝脏称重，并从肝组织取样置boin氏固定液固定，作病理学检查，观察各组肝脏损伤程度。