保肝功能研究试验方案

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1、保肝功能研究试验方案1、木瓜提取物：木瓜中齐墩果酸最佳提取参数为95%的乙醇、温度为60℃、时间3h、料液比为1∶8、原料粒度40目、提取2次。熊果酸最佳提取参数为95%的乙醇、温度为60℃、时间3h、料液比为1∶6、原料粒度60目、提取2次。用HPLC检测出的齐墩果酸与熊果酸的含量分别为：0.59%和0.12%2、乙醇肝损伤的方法：将小鼠随机分为乙醇对照组(n=6)和高(n=4)、低剂量(n=7)木瓜提取物预防组.乙醇对照组每日下午定时白酒灌胃6mL/kg;高、低剂量SAM预防组每日上午定时分别肌注SAM32和16mg/kg,下午定时白酒灌胃6mL/kg.实验两组连续给酒25和26d取血

2、作酶学检测并处死所有大鼠取肝脏制作石蜡切片,HE染色病理学观察.血清g-谷氨酰转肽酶(g-glutramyltranspeptidase,γ-GT，酒精性肝炎或酒精性肝硬化患者GT几乎都上升，为酒精性肝病的重要特征)由第四军医大学口腔医院检验科检测.态参量（56度北京二锅头）实验方案（改进）：高剂量组：240mg/Kg®0.2ml24mg/ml药物低剂量组：60mg/Kg®0.2ml6mg/ml药物配制：用56度酒配制即可，共配50ml.方法：实验前，每只老鼠称重（编号）。酒与药同时于每天上午。空白对照8只，不喂药和酒，只喂饲料和水；模型组：喂0.2ml酒，自由采食和水。药物组：1）高剂量

3、组：喂0.2ml24mg/ml药物，自由采食和水；2）低剂量组：喂0.2ml6mg/ml药物，自由采食和水；连续喂养20天后，称重，眼眶取血（分离血清，测定GT酶活性），称器官重，取肝，用4%甲醛固定后进行石蜡切片观察。3、CCl4肝损伤的方法：第一种方法：SD小鼠随机分为8组(正交配伍1～8组),每组6只,各组动物各按相当生药10g·kg-1灌胃给予相应的部位配伍液或蒸馏水,连续给药5d,1d1次。于末次给药2h后,参照文献方法,按7mL·kg-1给各组大鼠一次性腹腔注射10%的CCl4P植物油溶液,造成大鼠急性肝损伤模型。24h后,各组大鼠以10%水合氯醛麻醉,颈动脉取血,分离血清,用

4、赖氏法检测血清中ALT、AST的含量。给予CCl4后24h小鼠摘眼球取血,2500rPmin离心15min分离血清,用全自动生化分析仪(西班牙)测定血清中ALT、AST活力。实验方案（改进）：高剂量组：240mg/Kg®0.2ml24mg/ml药物低剂量组：60mg/Kg®0.2ml6mg/ml药物配制：用1%Tween-80配制即可，各配20ml.方法：实验前，每只老鼠称重（编号）。空白对照8只，不喂药，自由喂饲料和水；模型组：不喂药，自由采食和水。药物组：1）高剂量组：喂0.2ml24mg/ml药物，自由采食和水；2）低剂量组：喂0.2ml6mg/ml药物，自由采食和水；连续喂养7天后

5、，末次喂药后，对模型组和药物组的老鼠分别从尾静脉注射XmlCCl4，24h后称重，眼眶取血（分离血清，测定ALT，AST酶活性），称器官重，取肝，用4%甲醛固定后进行石蜡切片观察。注意：对照组测定时应测GT、ALT、AST。预试：用空白老鼠从腹腔分别注射100ml，20ml，2ml10%的CCl4（用色拉油配制）。24h后取血测定ALT、AST的活性是否增加。体重、心、肝、脾、肾的重量取肝脏,称重并计算肝脏系数[肝脏系数=肝脏重量(g)P空腹体重(g)×100]。取肝左叶用体积分数4%的甲醛溶液固定,石蜡包埋,用LEICA石蜡切片机(德国)制做组织切片,姬姆(HE)染色,显微镜下观察肝脏病

6、理组织学变化。4、D-半乳糖胺肝损伤的方法第二种方法：取红丝线草,剪成粗段,分别用95%乙醇和水回流提取,浓缩蒸干得醇提物和水提物。醇提物用适量水悬浮后依次用石油醚、水饱和的醋酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取,各部分萃取液浓缩得到不同极性部位浸膏。精密称取所需浸膏,用纯化水配成20g·kg-1(按生药材计算),备用。大鼠随机分成12组,每组8只。分别为肝炎模型组(A)、正常对照组(B)、乙肝宁组(C)、联苯双酯组(D)、石油醚高剂量组(E)、石油醚低剂量组(F)、醋酸乙酯高剂量组(G)、醋酸乙酯低剂量组(H)、正丁醇高剂量组(I)、正丁醇低剂量组(J)、水高剂量组(K)、水低剂量组(L)。正常对

7、照组和病理模型组每天灌胃给予纯化水,受试组和阳性对照组的动物每天根据剂量灌胃给药。在给药的第5天,除正常对照组外,其余各组动物均腹腔注射D-半乳糖胺,继续给药至第7天,于第8天从股动脉取血,离心,分离血清测定ALT、AST等生化指标,进行统计学计算;处死动物取肝脏称重,并从肝组织取样置boin氏固定液固定,作病理学检查,观察各组肝脏损伤程度。