细菌总数检测作业指导书

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1、细菌总数检测作业指导书1.试剂和培养基配制1.1试剂配制1.1.1氢氧化钠溶液(160g/l)：称取氢氧化钠160g,溶于1000ml的蒸憾水中。1.1.2吐温溶液：取lml吐温80,溶于2000ml蒸憾水中。1.2培养基配制1.2.12216E培养基的成分：蛋白月东5g；酵母膏lg；磷酸高铁0.lg；琼脂20g；陈海水1000mlo1.2.2制备：将上述成分加热溶解，用氢氧化钠溶液调节戸卅为7.6。分装于锥形瓶中，置高压蒸汽灭菌器中，在121°C下灭菌20min,而后，将此培养基分别倒入经灭菌的各平皿中，每平皿约15ml,待其冷却凝固，置冰箱内保存备用。2.样品采集2.1样品

2、瓶应用可耐灭菌处理的广口玻璃瓶或无毒的塑料瓶。灭菌前，把具有玻璃瓶塞得采样瓶用铝箔或厚的牛皮纸包裹,瓶颈系一长绳，在121°C经15min高压灭菌。2.2水样采集开瓶塞时，要连同铝箔一起拿开。手执长绳的末端，将采样瓶投入选定点的海水内，采集水下约10cm处水样。釆好的水样需盖紧瓶塞，编号瓶号，按表所列项目记录。水样在瓶内要留下足够的空间以备在检验前摇荡混匀。该法适用于沿岸水域的采集。1.3泥样采集用小型底栖生物柱状采泥器或弹簧采泥器采集泥阳，采泥器出水后，在预先选定的泥层中用无菌刮板取一定量的样品置于灭菌容器中。2.4样品保存和储藏采集的水样和泥样应立即送检，时间不超过2h,否

3、则,应将样品置于冰瓶或冰箱中，但不得超过24h,否则影响检验结果。3.1依水样量，按100ml水样加1ml吐温溶液，充分摇匀，使样品中的细菌细胞分散成单一细胞。2.2以无菌操作法吸取1ml水样注入盛有9ml灭菌陈海水的试管内混匀，并依同法一次连续稀释至所需要的稀释度。稀释度依水样含菌量而定，以每平皿的菌落数在30^300个之间为宜，每种稀释度需有3个平行样。1.3取0.lml稀释水样，滴入制好的平皿上，用灭菌玻璃刮棒将菌液涂抹均匀，平放于超净工作台上20〜30niin,使菌液渗入培养基。1.4将此平皿置于25°C恒温箱内培养7d,取出计数菌落。3.5菌落计数法：a）当平皿上出现

4、较大片菌苔时，则不应计数。b）选择菌落数在30~300个之间的平皿，以平均菌落数乘其稀释倍数，即为该水样的细菌数。c）若有两种稀释度的平均菌落数均在30~300个之间，则应按两者菌落数之比值决定，比值小于2,取两者的平均数，若大于2,取其较小的菌落数。d）若所有稀释度中各不同稀释度的平均菌落数均大于300,则以稀释度最高的平均菌落数乘其稀释倍数。e）若所有稀释度中各不同稀释度的平均菌落数均小于30,则用稀释度最低的平均菌落数乘其稀释倍数。f）若所有稀释度都没有长出菌落，同时也没检出抑制物，则报告小于1乘其最低稀释倍数。