资源描述：
《沙眼衣原体假定的包涵体膜蛋白免疫原性的筛选与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、沙眼衣原体pORF8质粒蛋白的表达及其单克隆抗体的制备与鉴定*粟盛梅I,李忠玉严,黄秋林彳,钟光明S周洲1,陆春雪】（1.南华大学病原生物学研究所,衡阳421001；2•南华大学第一附属医院,衡阳421001；3.徳州人学圣安东尼奥健康科学研究中心，徳州78229）【摘要】目的表达沙眼衣原体pORF8质粒蛋白，帘胎其单克隆抗体（mAb）,并鉴定其生物学特征。方法克隆表达pORF8融合蛋白并免疫小鼠制备致敏的脾淋巴细胞，脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞株；免疫荧光实验（IFA）筛选稳定分泌抗pORF8蛋口mAbs的阳性细胞株并鉴定m
2、Abs抗体类型；ELISA法测定mAbs效价；IFA、westernblot鉴定mAbs特异性。结果筛选出3株稳定分泌特异性抗pORF8mAb的杂交瘤细胞株，分别为5C2、12C7、12F8；抗体类型分别为IgM、IgG3、IgG3；杂交瘤细胞培养上清的抗体效价分别是1：2048、1：512、1：1024；12C7>12F8mAbs能同时特异性识别GST-pORF8.RFP-pORF8融合蛋白，但5C2仅识别GST-pORF8融合蛋口，而不识别RFP-pORF8融合蛋白。结论成功获得了3株分泌pORF8mAbs的细胞株，为研究pORF8质粒蛋白结构和功
3、能及建立特界敏感的沙眼衣原体检测方法夷定了基础。【关键词】沙眼衣原体；pORF8质粒蛋白；单克隆抗体*【基金项目】国家口然科学基金（30970165、81102230）；湖南省高校科技创新团队资助项目（湘教通12010J212号）**【通讯作者】李忠玉，Email:lzhyl023@hotmail.com【作者简介】粟盛梅（1971・），女，副教授，主要从事衣原体致病机制研究。ExpressionofpORF8plasmidproteinofChlamydiatrachomatisandPreparation,identificationofmonoc
4、lonalantibodiesagainstpORF8SuSheng-meiLiZhong-yu1,HuangQiu-lin2,ZhongGuang-ming3,ZHOUZhou1,LUChun-xue1(7.PathogenicBiologyInstitute.UniversityofSouthChina,Hengyang421001,China;!.FirstAffliatedHospitalofUniversityofSouthChinafHengyang421001,China.3.DepartmentofMicrobiologyandImm
5、unology,UniversityofTexasHealthScienceCenteratSanAntonioJX78229tUSA)[Abstract]ObjectiveToexpresspORF8plasmidproteinofChlamydiatrachomatisandidentifythemonoclonalantibodiesagainstpORF8plasmidprotein.MethodspORF8fusionproteinwasexpressedinE.coliXL1Blueandpurifiedwithglutathione-co
6、njugatedagarosebeads,thenthepurifiedproteinwasusedtoimmunizeBALB/cmice,thespleencellsisolatedfromtheimmunizedmicewerefusedwithSP2/0myelomacellstogeneratemonoclonalantibodiesagainstpORF8protein.Immunofluorescenceassay(IFA)wasperformedtoscreenthepositivehybridomacellsandidentifyth
7、eantibodyisotypes.ThetiterofthemAbswasdeterminedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).AndthespecificitywascharacterizedbyIFAandWesternblot.ResultsThehybridomacelllines,named5C2,12C7and12F&stablysecretingspecificmAbsagainstpORF8wereobtained,thetiterofthreemAbsfromcellculturewe
8、re1:512,1:2048and1:1024respectively.ThemAbsecre
