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《张宣琪土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选与鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、张宣琪土壤中产淀粉酶芽砲杆菌的筛选与鉴定土壤中产淀粉酶芽砲杆菌的筛选及鉴定广州人学生命科学学院姓名：张宣琪班级：生技121班学号：1214300094同组组员：徐婷婷刘海伦张黎明崔仁洪叶毅航1一、摘要本实验从土壤中分离出能产淀粉酶的芽砲杆菌并对其进行鉴定、保存，实验中涉及菌株的分离纯化、菌株的形态学鉴定和生理生化鉴定，根据伯杰式细菌学手册鉴定其种属。实验屮通过80°C水浴20min预处理，杀死无芽砲菌体，筛选出芽抱杆菌；再川稀释涂布平板法对芽砲杆菌进行初步筛选；又通过分区划线法对初筛菌株进一步分离纯化；最后用选择性淀粉培养基进行筛选，得到纯培养的产淀粉的芽他杆菌。最后并通过耐
2、盐试骑、明胶试验、糖发酵试验、VP试验、口引味试验等多项牛理牛化实验对筛选出來的菌种进行鉴定，鉴定结果为蜂房芽抱杆菌。二、关键词：淀粉酶芽鞄杆菌生化鉴定三、实验材料与方法1、实验材料1.1土样的采集选取广大梅苑公寓楼下花园、广大生化楼前小河附近两处的土壤，五点法采集，边长15cm。铲去表层土，取10cm深十•壤，每一个十•样约25g左右（每个点5g）。将十•样放入无菌的纸袋中，并记录采集的时间、地点、植被类型,4°C冰箱中保存备用。分别记做A土样、B土样。1.2培养基淀粉筛选培养基淀粉20g,蛋白豚10g,NaCl2.5g,琼脂10g,自来水1000ml,pH自然。斜面种了培
3、养基牛肉膏3g,蛋白豚10g,NaCl5g,琼脂15〜20g,自来水1000ml,plI7.2〜7.4；蛋白腺液体培养基（作口引味实验用）蛋白JJ东10g,NaCl5g,自来水1000ml,pH7.2〜7.4,121°C灭菌20min；2葡萄糖蛋口豚培养基（VP和MR试验用）蛋白月东5g,葡萄糖5g,NaCl5g,自来水1000ml,pH7.2〜7.4,121°C灭菌20min；糖发酵培养基（作糖酵解试验丿ID蛋白月东2g,NaCl5g,K2IIPO40.2g,1%滉麝香草酚蓝水溶液3ml,待试糖10g（—般糖或醉按1%量加入，而半乳糖、乳糖按1.5%的量加入），自來水100
4、0ml,pH7.2〜7.4；酪氨酸平板（作酪氨酸水解试验用）L—酪氨酸0・5g悬浮于10mL蒸馆水中,20分钟灭菌,然后于100讥无菌的营养琼脂混介，即成酪氨酸水解平板；酪索平板（作酪素水解试验用）取5g脱脂奶粉加入50mL蒸傳水中（或用50mL脱脂牛奶）,另称1.5g琼脂溶于50mL蒸係水中，将两液分开灭菌。待冷至45—50°C时，将两液混匀倒平板，即成牛奶平板；西蒙斯氏柠檬酸盐培养液（作柠檬酸盐利用试验用）柠檬酸钠2g,NaCl5g,MgS04・7H200.2g,K2HP04・3H201g,（NH4）2HP041g,1%混麝香草酚蓝水溶液10ml,琼脂15〜20g,自來水
5、1000ml,plI7.0,121°C灭菌20min；淀粉牛肉音蛋白豚琼脂培养基可溶性淀粉2g,牛肉膏3g,蛋白腺10g,NaCl5g,琼脂15〜20g,蒸饰水1000mL,pH7.2〜7.4；（2%、5%、7%）高盐培养基（做耐盐试验用）3牛肉膏3g,蛋白淼10g,NaCl（2g.5g、7g）,琼脂15〜20g,蒸谓水1000mL,pH7.2〜7.4；明胶培养基（做明胶液化试验用）牛肉膏3g,蛋白丿冻10g,明胶12g,蒸憾水1000mL,pH7.0；半固体培养基（作运动性实验用）琼脂含量0.5%,其他组分比例按牛肉膏蛋白腺培养基配制；1.3试剂和仪器1.3.1试剂耐盐性试
6、验：NaCl粉末。糖酵解实验：葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇。革兰氏染色：草酸钱结晶紫染色液，卢戈氏碘液，95%乙醇，0.5%沙黄染色液。芽泡染色：5%孔雀绿染色液，0.5%沙黄染色液。V.P试验（MR试验）：40%Na0H溶液，—奈酚。II引卩朵试验：乙腿郦试剂。碘原液：碘llg,碘化钾22g,加水定容至500mLo单染色：草酸讓结晶紫或石炭酸复红。硝酸盐试验：卬液（对氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100mL；乙液（a-奈胺0.+5mol/醋酸lOOmL）:酪素水解：脱脂奶粉。酪氨酸水解：I厂酪氨酸。4溶菌酶抗性实验：溶菌酶。卵黄反应：新鲜鸡蛋。硝酸盐试验：硝酸盐明胶
7、液化试验：明胶柠檬酸盐利用试验：西蒙斯氏柠檬酸盐1.3.2仪器：无菌培养皿，接种环，土样，三角瓶，烧杯，试管，酒精灯，无菌吸管，载玻片，吸水纸，涂布器，显微镜，移液管，移液枪等。恒温摇床，恒温培养箱，高压蒸汽灭菌箱，超净工作台，恒温水浴箱，磁力搅拌器等。2、试验方法1.1土壤样品悬液制备2.1.1土壤悬液制备各称取5g土壤样品于装有45ml无菌水的100ml.锥形瓶屮，加入玻璃珠与十•壤悬液一起振荡，制成土壤悬液。置100°C沸水浴10min,以杀死非芽砲杆菌。静置5min。2.1.2土壤悬液稀释吸取上
