张嗣同发酵工程第四章种子的扩大培养25

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1、第四章种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种子制备的技术概要第一节种子扩大培养的目的与要求种子扩大培养的概念:种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养，最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。种子扩培的目的□接种量的需要□菌种的驯化□缩短发酵时间、保证生产水平种子的要求:□总量及浓度能满足要求□生理状况稳定，个体与群体□活力强，移种至发酵后，能够迅速生长□无杂菌污染第一节种子制备过程举例一、谷氨酸生产的种子制备制备过程f二级种子培养III斜面菌种f一级种子培养1、斜面(AS

2、1.299)培养基：蛋白腺1%,牛肉膏1%,氯化钠0・5琼脂2%,pH7.0-7.2培养条件：32°C,生长18・24小时培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次2•—级种子（摇瓶）培养基：葡萄糖2%,尿素0.5%,玉米浆2.5%,K2HPO40.1%培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32°CJe养12小时。培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基3.二级种子（种子罐）培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5%培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%）,32

3、°C培养7・10个小时:长菌体，更接近于发酵培养基种子的质量要求:108・109个/ml大小均匀，呈单个或八字排列PH7・0・7・2时结束，6・8—8—7・0・7・2活力旺盛大米抱子III1、青霉素生产的种子制备制备过程I一级种子二级种子•、斜面抱子培养基：甘油、葡萄糖、蛋白豚等培养条件：25°C、7天，注意湿度50%左右:有利于长抱子，用量少而精细1、大米抱子培养基：大米及氮源（玉米浆）培养条件：25°C、7天，控制湿度培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于砲子的生长。:1粒米含1.4*106个抱子3、一级种子培养基：（葡萄

4、糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆培养条件：27°C,40小时接种量：200亿抱子/吨目的：长菌体4、二级种子培养基：同上培养条件：27°C、10-14小时接种量：10%种子的质量要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空砲，处于III—IV期青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1・4为年青期，4・6期合成青霉素的能力最强第二节种子制备的技术概要一、种子制备的过程实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备,在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成,此现象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。:种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生

5、产车间阶段。二、实验室阶段1、培养物选择的原贝U目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类：□对于不产抱子和芽胞的微生物一一获得一定数量和质量的菌体对于不产芽?&和抱子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。□对于产抱子的微生物＞获得一定数量和质量的抱子菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。＞获得一定数量和质量的菌丝体便于操作，但需要更仔细的控制。2、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对抱子培养基应该是有利于抱子的生长。在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保

6、证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。3、起始接种物的传代问题保藏斜面一活化斜面□产抱子保藏一母斜面一子斜面:使菌种的传代次数尽可能的少。砲子培养母瓶：活化、纯化，使保藏菌种生长，并去处变异株。所以接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。子瓶：大量繁殖，得到大量抱子。接种：①从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落②接种时密一点，得到大量的抱子。抱子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月三、生产车间阶段1、培养物的选择原贝IJ在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。菌丝体比抱子要有利:□缩短发酵时间□有利于获得好的发酵结果2、培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌

7、体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于抱子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因：一是成本二是驯化例：柠檬酸发酵□以蔗糖为原料成分斜面麦芽汁麦汁蔗糖NH4NO3k2hpo4MgSO4.H2OKC1琼脂2%种子罐发酵2.5-5%20%0.225%0.11%0.03%0.025%0.025%0.015%□薯干粉成分斜面麦芽汁麦汁薯干粉(NH4)2SO4琼脂2%种子罐发酵