发酵——种子的扩大培养

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1、第四章种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种子制备的技术概要种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。第一节种子扩大培养的目的与要求种子扩大培养的概念:种子扩培的目的接种量的需要菌种的驯化缩短发酵时间、保证生产水平种子的要求：总量及浓度能满足要求生理状况稳定，个体与群体活力强，移种至发酵后，能够迅速生长无杂菌污染第一节种子制备过程举例一、谷氨酸生产的种子制备制备过程斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵1、斜

2、面(AS1.299)培养基：蛋白胨1%，牛肉膏1%，氯化钠0.5琼脂2%，pH7.0-7.2培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细培养条件：32℃，生长18-24小时生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次2.一级种子（摇瓶）培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培养12小时。培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆2.5%，K2HPO40.1%，硫酸镁0.04%pH7.0培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基一级种子质量要求种龄：12hpH值：6.4±0.1光密度：净增OD值0.5以上残糖：

3、0.5％以下无菌检查：(-)噬菌体检查：(-)镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐革兰氏阳性反应3.二级种子(种子罐)培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%），32℃培养7-10个小时培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5%培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基通风量:50L种子罐1:0.5,搅拌转速340r／min；250L种子罐1:0.3,搅拌转速300r／min500L种子罐1:0.25,搅拌转速230r／min种子的质量要求：108-109个/ml大小均匀，呈单个或八字排列PH7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2活

4、力旺盛无菌检查二、青霉素生产的种子制备制备过程安培管→斜面孢子→大米孢子→一级种子→二级种子→发酵1、斜面孢子培养基：甘油、葡萄糖、蛋白胨等培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细培养条件：25℃、7天,注意湿度50%左右2、大米孢子培养基：大米及氮源（玉米浆）培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。培养条件：25℃、7天，控制湿度大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子3、一级种子培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆目的：长菌体培养条件：27℃，40小时接种量：200亿孢子/吨4、二级种子

5、培养基：同上培养条件：27℃、10-14小时接种量：10%三、啤酒酵母的扩大培养三级扩大培养扩大倍数：第1级到第2级为8-10倍第2级到第3级为4-6倍1，实验室扩大培养2，车间扩大培养从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种接种方式：从种子罐接种：种子的质量要求菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ—Ⅳ期青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强第二节种子制备的技术概要一、种子制备的过程实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此现象地将这些培养过程称为实验室

6、阶段的种子培养。生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。二、实验室阶段1、培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点最终的培养物可分为两类：对于不产孢子和芽胞的微生物——获得一定数量和质量的菌体对于不产芽孢和孢子的微生物，实验室阶段的种子扩培最终是获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。获得一定数量和质量的孢子菌丝体培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。对于产孢子的微生物获得一定数量和质量的菌丝体便于操作，但需要更仔细的控制。例：放线菌孢子的制备采用琼脂

7、斜面培养基，培养基含麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些无机盐等。培养温度一般为28˚C。培养时间为5~14天。2，厌氧培养：对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒等）试管→三角瓶→卡式罐→种子罐对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，如产链霉素的灰色链霉菌、产卡那霉素的卡那链霉菌可以用摇瓶液体培养法。将孢子接入含液体培养基的摇瓶中，于摇瓶机上恒温振荡培养，获得菌丝体，作为种子。试管→三角瓶→摇床→种子罐2、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料

8、一般都比较精细。3、起始