种子的扩大培养及灭菌

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1、种子扩大培养的目的与要求种子制备实例种子制备的技术概要种子的扩大培养http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。种子扩大培养的概念:种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc种子扩培的目的接种量的需要菌种的驯化缩短发酵时间、保证生产水平种子的要求：总量及浓度能满足

2、要求生理状况稳定活力强，移种至发酵后，能够迅速生长无杂菌污染种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc一、谷氨酸生产的种子制备制备过程斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc1、斜面(谷氨酸棒杆菌AS1.299)培养基：蛋白胨1%，牛肉膏1%，氯化钠0.5琼脂2%，pH7.0-7.2培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细培养条件：32℃，生长18-24小

3、时生长斜面要求：生长良好，所使用斜面连续传代不超过3次种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc2.一级种子（摇瓶）培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培养12小时。培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆2.5%，K2HPO40.1%培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc3.二级种子(种子罐)培养条件：

4、在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%(10%)），32℃培养7-10个小时培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5%培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc种子的质量要求：108-109个/ml大小均匀，呈单个或八字排列PH7.0-7.2时结束活力旺盛种子的扩大培养种子扩大培养的目的与要求http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc一、种子制备的过程1-砂土孢子；2-冷冻干燥孢子；

5、3-斜面孢子；4-摇瓶液体培养；5-茄子瓶斜面培养；6-固体培养基培养；7、8-种子罐培养；9-发酵罐种子的扩大培养种子制备的技术概要http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc二、实验室阶段1、培养物选择的原则目的：种子扩培到一定的量和质，根据菌种的特点，最终培养物可分为两类：对于不产孢子和芽孢的微生物——获得一定数量和质量的菌体种子的扩大培养种子制备的技术概要http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc获得一定数量和质量的孢子孢子培养步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但

6、操作繁琐。对于产孢子的微生物获得一定数量和质量的菌丝体便于操作，但需要更仔细的控制。种子的扩大培养种子制备的技术概要二、实验室阶段http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc2、培养基选择的原则培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。种子的扩大培养种子制备的技术概要二、实验室阶段http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc三、生产车间阶段1、培养物

7、的选择原则在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。缩短发酵时间有利于获得好的发酵结果菌丝体比孢子要有利：种子的扩大培养种子制备的技术概要http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc2、培养基选择的原则目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所以营养要比发酵培养基丰富。在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因:一是成本二是驯化种子的扩大培养种子制备的技术概要三、生产车间阶段http://biotech.ecus

8、t.edu.cn/jpkc/fjgc例：柠檬酸发酵以蔗糖为原料成分斜面种子罐发酵麦芽汁麦汁蔗糖2.5-5%20%NH4NO30.225%0.11%K2HPO40.03%MgSO4.H2O0.0