植物保护专业毕业论文

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1、木科毕业论文题目稻曲菌产色素缺陷性突变的生物学特性姓名学号专业植物保护指导教师密级分类号华中农业大学本科毕业论文稻曲菌产色素缺陷型突变体的生物学特性Thebiologicalcharacteristicsofthericeaspergillosisproductionofthepigmentdeficientmutant华中农业大学植物科学技术学院二O—二年六月目录摘要IAbstractIll1.前言21.1稻曲病在我国的背景21・2实验原理22材料与方法32.1材料32.1・1菌株32.1.2培养基和相关试剂32.1.3限制性内切酶及其它酶类、试剂盒42.1

2、.4载体、DNA分子量标记52.1・5抗生素52.1.6引物62.1.7供试水稻品种62.1.8盆钵及接种器规格62.2稻曲菌T-DNA插入体库的构建错误！未定义书签。2.2.2稻曲菌分生鞄子培养方法62.2.3农杆菌培养方法72.2.4ATMT转化方法72.2.5转化子保存方法72.2.6转化子的色素缺陷型筛选82.3稻莒菌S-81的T-DNA侧翼序列克隆及序列分析82.3.1基因组总DNA的提取82.3.2突变体基因组DNA的酶切产物连接及连接产物的冋收92.3.3酶切92.3.4连接92.3.5反向PCR扩增92.3.6目的片段的回收及连接112.3.7

3、连接产物的转化112.3.8重组质粒的提取及PCR鉴定112.3.9重组质粒的测序及克隆序列分析122.4转化子的致病力测定122.4.1水稻种植122.4.2接种体的制备122.4.3接种吋期和方法122.4.4调查与统计123结果与分析142.1稻曲菌T-DNA插入体库的构建143.2稻曲菌—。皿插入体库的检测143.3突变体菌株S-81形态特征、菌丝生长速度及产抱量测定15163・4侧翼序列全长及相关分析17182.5突变体菌株S-81的致病性测定204、讨论22参考文献24致谢26摘要摘要水稻稻曲病是由稻曲病菌(Ustilaginoideavirens

4、(Cooke)Tak)引起的一种穗部病害。该病害在世界各水稻种植区均有不同程度的发生，并II在某些年份曾一度人发生。木藏良三(1991)首先报道白色稻曲球的发生，白化菌株稻曲球的表层和内层均为白色。国内王疏(1997)等首先报道发现白色稻曲球，PS培养基中产分他量极少,厚垣砲子表面光滑，PS滤液对水稻根和芽有毒性，可以使水稻发病产生白色稻曲球,用酯酶同工酶和RAPD分析认为白化菌株具有独立于稻曲病菌新的分类地位。林逾凡(2009)报道口化菌在固体培养基(PSA)、液体培养基(PS)上均不产生任何类型的抱子。白化菌株的接种试验结果显示，突变后的菌株不能使水稻发病

5、。白化菌株的ITS序列和止常菌株的同源性达到100%o说明这种白化菌株属于稻曲病病原菌。木研究利用ATMT遗传转化系统，以质粒pTFCM为转化体，利用潮霉索抗性筛选转化子，对稻曲病菌分生砲子进行了转化。构建了含1500多个的T-DNA插入突变体库。随机挑取10个转化子，以稻曲菌野生型菌株HWD・2和质粒pTFCM为对照，提取基因组DNA进行PCR检测，质粒pTFCM和10个样品均扩增岀潮霉索磷酸转移酶基因片段，野生型稻曲病菌株HWD・2不能扩增到潮霉素磷酸转移酶基因片段。通过潮霉索筛选和PCR检测，可证明T-DNA已成功地插入到了稻曲病菌基因组中。目前己经对1

6、500个转化子的菌落形态差异进行了比较，得到到11株产色素缺陷的白化菌株,分别为B-12,F-18,F-24,F-37,F-56,F-61,F-64,G-6,G-29,J・44和S・81。对产砲量进行测定,白化菌株S・81的产砲量达2.3X106(个/ml),其他白化菌株儿乎不产砲，野生型HWD・2产砲量达8.6X106(个/ml)对生长速度进行测定，白化菌株S-81的生长速度为2.24mm/d,比野生型HWD-的生长速度快但差异不显著(P>0.05)。对致病力进行测定，野生型菌株HWD-2能引起水稻发病，水稻穗部产生黄绿色的稻曲球，显微观察可见人量的黄色厚垣

7、砲子，S-81也可以引起水稻发病，水稻穗部形成白色稻曲球，显微观察可见大量的白色厚垣抱了。采用反向PCR技术对白化菌株S-81屮T-DNA插入位点的侧翼序列进行克隆，将扩增产物纯化后连接到PMD18-T载体上进行克隆测序分析，结果获得口化菌S-81的T-DNA的插入位点右侧的DNA片段。经过测序和将推定的氨基酸序列在NCBI上进行同源性比对发现，S-81的T-DNA侧翼序列和绿僵菌的起始识别复合物亚基(originrecognitioncomplexsubunit)的蛋白质序列同源性最高达到83%,E值为3e-17k关键词：稻曲病菌；白化菌株；突变休;致病性A

8、bstractAbstractRice