山东花生腐霉根腐病病原鉴定

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1、山东花生腐霉根腐病病原鉴定摘要：利用组织分离技术和选择性培养基纯化技术对山东地区花生腐霉根腐病的病原菌进行了分离和纯化。按照柯赫法则，根据余永年真菌形态学鉴定方法及利用ITS序列比对等分子生物学方法对病原菌进行了鉴定。结果表明，引起山东地区花生腐霉根腐病的病原菌为群结腐霉（PythiummyriotylumDrcchslcr）、旋柄腐霉（Py〃血加Drcchslcr）、畸雌腐霉（Py/加“加irrgMd"Buisman）以及终极腐霉CPythiumultimumTrow）。关键词：花牛；腐霉；根腐病；鉴定IdentificationofPeanutPythiumRootRotPathogen

2、inShandongAbstract：PathogenofpeanutPythiumrootrotpathogeninShandongwasisolatedandpurifiedbytechniquesoftissueisolationandselectivemedia.BasedonKochesrule,thepathogenwasidentified.bythemethodsofFungalmorphologicalandITSsequencealignment.AnditindicatedthatthepathogenofpeanutPythiumrootrotpathogeninSh

3、andongwasPythiummyriotylumDrechsler>PythiumhelicoidesDrcchslcr>PythiumirregulareBuismanandPythiumultimumTrow.Keywords:peanut;Pythium;rootrot;identification近年来，随着种植花生经济效益的不断提高，山东省的花生种植面积也在不断增长，目前主要划分的两大优势区域，一是以种植春花生为主的胶东半岛、鲁中和鲁东南地区的29个县；二是以种植夏花生为主的鲁西和鲁西南地区黄河故道的5个县。其小花生腐霉根腐病是影响山东花生产量的主要因素Z-,由于种植而积大，产

4、区集中，连作面积广，给花生生产造成了很大危害。花生根部病害调查分离时，我们从以上大部分地区的花生病株中分离到了腐霉菌（PW加Msp）,为了明确山东省花生腐霉根腐病的病原特征及生物学特性，为防治提供依据，作者于2007-2009年度对山东花生腐霉根腐病病原进行了研究，结果报道如下。1材料与方法1.1症状表现调查方法对山东地区不同花生产区的花生进行出间病害调查并采集发病样本，记录花生从播种到收获是否能受到腐霉的侵染而发病，被害植株是否萎驚，须根的腐烂情况以及初生根、次生根和主根的尖端是否特别容易受害，根系是否完全被破坏[1]O1.2病原菌分离与纯化方法将从田间采集的病株须根系用H来水冲洗干净，用

5、吸水纸吸干表而的水珠，将病株须根系剪成长5mm的小块，将其放置于VP?选择性培养基中〔2]25°C培养。24h后不断观察，发现有腐霉长出立即转移到CMA培养基上放在25°C恒温箱中培养，纯化，转入CMA斜面培养，5d后菌丝长满，放入4°C冰箱保存备用。1.3病原菌致病性测定方法按照柯赫法则⑶，采用盆栽接种测定方法测定病原菌的致病性，将土壤灭菌后装屁盆，种屁生（屁育22）,花生团棵后，把4°C保存的菌种在CMA培养基上25°C扩繁，长满菌丝后按4%（菌:±）的接种量，与花盆内的土壤混匀，保湿筒保湿48h后调查发病情况，调查持续一周，从病组织分离回接菌种，并作单菌丝培养。1.4病原菌种类鉴定方法

6、1.4.1病原菌最适温度及pH值测定将PDA培养基制成平板。将事先培养好的直径5mm的病菌圆饼转接在平板中央，分别置于4°C、10°C、15°C、20°C、25°C、30°C和35°C进行病原菌最适生长温度测定。在将PDA培养基的pH值调至3-12,按照上述方法将接好菌饼的培养皿置于25°C恒温培养箱内培养，定期观察，记录菌落生长速率以及菌落形态特征。1.4.2病原菌形态观察将腐霉菌在CMA平板培养基上培养，3d后移取边缘菌丝至皮氏（Petri）培养液中，25°C培养1〜3d挑取砲子囊，观察抱子囊形态，有无层出现象，游动抱子的游出方式,并且测量砲子囊大小。待出现藏卵器、雄器、卵抱子后,观察藏

7、卵器、雄器的形态，着生位置，配合情况及卵砲子的形态特征，每项指标分别观察测量100个，并且测量其大小，计算平均值⑷。鉴定则依据抱子囊、藏卵器、雄器、卵孑包子的形态特征，大小及其特性来鉴定，主要参考《中国真菌志》（第六卷，科学出版社，余永年主编）进行鉴定⑴。1.4.3病原菌ITS序列测定将事先用CMA平板培养好的病原菌的菌落刮取下来，利用Biospin植物基因组DNA提取试剂盒进行DNA提取，而后利用通用引物(