成栋学院实验指导

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1、实验细胞膜的渗透反应一、实验目的1.了解细胞膜对物质通透性的一般规律：细胞膜的渗透性及各类物质进入红细胞的速度。2.了解溶血现象及其发生机制。二、实验原理细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一•种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分了町以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。渗透作用是细胞膜的主要功能Z-O将红细胞放在低渗盐溶液屮，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋口释放到介质屮，山不透明的红细胞悬液变

2、为红色透明的血红蛋H溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对某些溶质具有通透性，溶质可进入细胞内，导致膜内渗透压升高，胞外的水随之进入细胞内，发牛•溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞进度的一•种指标。木实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化,判定红细胞対不同物质的通透性如何。三、实验材料鸡血四、实验器材50ml小烧杯＞10ml移液管、试管（15ml）、试管架。五、实验试剂抗凝剂：肝素（5ug/ml）0.17M氯化钠0.17M氯

3、化鞍0.17MRS酸较0.17M硝酸钠0.12M草酸钱0.12M硫酸钠0.32M衞萄糖0.32M甘油0.32M乙醇0.32M丙酮六、实验方法（一）鸡红细胞悬液以肝素液湿润5ml注射器内壁，推出多余的肝素液（针头内必须昭下肝素液，不要进空气），取鸡的静脉血2ml左右。取50ml小烧杯一只，加一份鸡血和十份0.17M氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血。（二）低渗溶液取试管一只加入10ml蒸馆水，然后再加入1ml稀禅的鸡血，混匀，注意观察溶液的颜色变化，市不透明的红色逐渐澄清，红细胞发牛破裂，造成100%红细胞溶血

4、，使光线比较容易透过溶液。（三）鸡红细胞的渗透性1、取试管一只，加入0.17M氯化钠溶液10ml,再加入1ml稀釋的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血•现象？为什么？2、取试管一只，加入0.17M氯化钱溶液10ml,再加入lml稀释的鸡血，轻轻摇动，注意是否有颜色变化？是否有溶血现彖？若发牛溶血，记下时间（口加入lml稀释鸡血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。3、分别在下列八种等渗溶液中进行实验，步骤同2。（1）0.17M醋酸钱（2）0.17M硝酸钠（3）0.12M草酸钱(4)0.12M硫酸钠(5)0.32M葡萄糖

5、(6)0.32M甘油(7)0.32M乙醇(8)0.32M丙酮七、注意事项1.肝素用量要适宜，过少无抗凝作用，过多易导致溶血。2.为了保证实验结果的精确性，应准确计时，并确定开始计时的标准和完全溶血的标准。3.冇的溶液不发生溶血，冇的发生溶血时间比较长，可以将他们与对照组(氯化钠组)一起对比，如果发现有溶血现彖但尚未完全溶血的说明该溶液可使血细胞发牛溶血，只是时间未到，但是如果与对照无差别，说明它不会使血细胞溶血。八、实验报告将观察到的现象记录，并进行分析比较和讨论(填写表格)。管号处理是否溶血时间(单位)结果分析110ml氯化

6、钠+1ml稀释鸡血210ml氯化钱+lml稀释鸡血310ml醋酸钱+lml稀释鸡血410ml硝酸钠+lml稀释鸡血510ml草酸馁+lml稀释鸡血610ml硫酸钠+1ml稀释鸡血710ml葡萄糖+1ml稀释鸡血810ml甘油+lml稀释鸡血910ml乙醇+lml稀释鸡血1010ml丙酮+1ml稀释鸡血九、思考1.红细胞在不同溶液中溶血时间为什么不同?2.试述细胞膜有哪些种跨膜运输的机制？实验二红细胞的计数一、实验目的掌握动物细胞计数的方法。二、实验原理细胞计数板是由特殊硬质玻璃载物片构成。计数板的中央部分冇四条沟，形成三条隆起

7、,两边较窄的隆起，是放置盖玻片用。中央较宽隆起部分，可冇一个或两个计数空用来计数口细胞和红细胞。中央的隆起比两边的隆起低0」毫米，因此盖上盖玻片，在这一间隙中充满红细胞稀释液时，其深度恰好为0.1毫米。其计数部分是由一个长3mm宽3mm深0.1mm的小室，其上被等分为9个大方格（其边长为1mm）,中间的人方格乂用双线等分为25个中方格（其边长为lmin/5=0.2mm）,每个屮方格乂被单线等分为个16小方格（小方格的边长为0.2mm/4=0.05mm）o计数时，通常选择计数室中央人方格四角和中央的五个中方格（每个屮方格包含16

8、个小格）来计数。三、实验材料鸡血。四、实验器材①剪刀②玻璃毛细管③载玻片④细胞计数器⑤细胞计数板和相应的盖玻片⑥复式显微镜五、实验试剂①抗凝剂：肝素（5mg/ml）o②血细胞稀释液：NaCl0.9g,加蒸镉水至lOOmlo六、实验方法1、杀鸡取血，加入适量抗凝剂（取0.3ml