断血流总黄酮的提取分离及鉴定

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1、作者：1曹旭芬（组长），2代皖娟，3方祥明，4胡顺莉，5李珊珊，6曾德禄08中药（2）班2011年6月断血流总黄酮的提取分离及鉴定概述断血流（HerbaClinopodiiPolycephali）为唇形科植物荫风轮Clinopodiumpolycephalum（Vaniot）C.Y.WuetHsuan或风轮菜Clinopodi-umchinensis（Benth.）O.Kuntze的干燥地上部分，主要含有黄酮、皂苷、挥发油等多种活性成分,具有止血、抗菌、抗炎及免疫等药理活性,临床主要用于治疗功能性子宫出血等症。在风轮菜属植物中，黄

2、酮是含量较高的一类化合物，如香蜂草苷、芹黄素-7-o-β-吡喃葡糖、芹菜素一7一o一β一吡喃葡糖、槲皮素、木犀草素、柚皮素-7-芸香糖苷、江户樱花苷、异樱花素等。断血流药材2乙醇提取法、溶剂萃取法、富集纯化对断血流有效成分提取分离，化学反应及薄层色谱定性检识，分光光度法及高效液相色谱法对其含量测定方法选择实验目标1以断血流为例学习黄酮类化合物的提取、分离工艺，掌握中药黄酮类化学成分的主要性质、部分鉴定方法及含量测定原理。1熟悉黄酮类化学成分的结构与性质23掌握断血流有效成分的提取分离原理及操作技术掌握断血流有效成分的定性检识与含量

3、测定的方法及步骤实验目的实验原理黄酮苷类以及极性稍大的苷元（如羟基黄酮等），一般可用丙酮、乙酸乙酯、乙醇提取。大多数黄酮苷元宜用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等中极性溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离苷元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取。利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行萃取可达到精制纯化目的。溶剂萃取过程在除去杂质的同时，往往还可以收到分离苷和苷元或极性苷元与非极性苷元的效果。黄酮苷类虽有一定极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水提取液中加入酸，黄酮苷类即可沉淀析出。通过纸色谱及紫外光

4、谱可进行黄酮及糖的鉴定。类型基本结构类型基本结构黄酮二氢查耳酮黄酮醇花色素二氢黄酮黄烷-3-醇二氢黄酮醇黄烷-3，4-二醇异黄酮双苯吡酮二氢异黄酮橙酮查耳酮断血流中的部分黄酮类化合物木犀草素(5，7，3ˊ，4ˊ-四羟基黄酮)芹菜素(5，7，4-三羟基黄酮)山柰酚(3，5，7，4ˊ-四羟基黄酮)香糖橙皮苷实验仪器及药品托盘天平，电炉，石棉网，量筒，AB-8大孔吸附树脂，试管，烧杯（1000ml），圆底烧瓶，球形冷凝管，漏斗，抽滤瓶，布氏漏斗滤纸，滴管，移液管，容量瓶，铅笔，铁架台，橡皮管，紫外灯，硅胶(青岛海洋化工厂出品)-CMC-

5、Na板，美国SSIPC2001高效液相色谱仪，D101型大孔吸附树脂柱。断血流，60%乙醇，95%乙醇，无水乙醇，乙酸乙酯，5%氢氧化钠，浓盐酸，1%盐酸，镁粉，甲醇，四氢硼钠，1%三氯化铝乙醇溶液，1%三氯化铁醇溶液，硼酸，苯-乙酸乙酯-醋酸-95%乙醇（20：15：15：15）上层溶液，1%氯氧化锆甲醇液，橙皮苷与香蜂草苷标准品乙醇液，10％NaNO2溶液，10％Al(NO3)3溶液，1mol／lNaOH溶液，30％乙醇，乙腈-水（48：52）（用磷酸调节PH至3.0），蒸馏水乙醇提取法提取，溶剂萃取法分离、大孔吸附树脂分离纯

6、化药材60%乙醇，加热提取液浓缩（药材:水=1:2），3~4倍量95%乙醇，冷藏提取液合并、浓缩，浓缩至一定程度后加水稀释，醇水液沉淀水液浓缩，回收乙醇，加水依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层氯仿层乙酸乙酯层正丁醇层水层叶绿素等脂溶性成分黄酮苷元大极性苷元小极性的苷黄铜苷多糖蛋白质浓缩，回收乙酸乙酯，加水水液过AB-8大孔吸附树脂，然后用无水乙醇溶液洗脱，回收溶剂，得到粗提物。酸水解（盐酸，调pH3~4）沉淀（苷及苷元）乙醇提取法提取药材50g60%乙醇500ml，加热，回流1.5h抽滤提取液浓缩（药材:水=1:2约

7、100ml），95%乙醇400ml，冷却析出沉淀。抽滤。醇水液沉淀溶剂萃取法分离醇水液浓缩，回收乙醇至50ml水液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层氯仿层乙酸乙酯层正丁醇层水层叶绿素等脂溶性成分黄酮苷元大极性苷元小极性的苷黄酮苷多糖蛋白质大孔吸附树脂富集纯化乙酸乙酯层浓缩，回收乙酸乙酯，加水水液过AB-8大孔吸附树脂，然后用95%乙醇溶液洗脱（洗脱剂的用量为树脂床体积的三倍），回收溶剂，得到粗提物。酸水解（盐酸，调pH3~4）沉淀（苷及苷元）AB-8大孔树脂的预处理用95%的乙醇充分浸泡，洗涤，至洗涤液无乳白色，再用

8、蒸馏水洗去乙醇，至洗涤液无纯味，然后用5%的HCl溶液浸泡三小时，用蒸馏水洗至中性，最后用5%的NaOH浸泡三小时，用蒸馏水洗至中性。理化检识1.1盐酸镁粉反应将样品溶于甲醇或乙醇中1ml中，加入少许镁粉振摇，再滴加几滴浓盐酸，1-2分钟内（必要时