黄酮的提取与分离

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1、第三节提取与分离一、提取1、黄酮苷类与极性较大的苷元(羟基黄酮,双黄酮,橙酮,查耳酮等)——丙酮,乙酸乙酯,乙醇,甲醇,甲醇-水(1:1)等提取2、多糖苷类:沸水提取3、花色苷类:0.1%盐酸提取4、黄酮苷元:氯仿,乙醚,乙酸乙酯等提取（一）溶剂萃取法1、原理：黄酮类化合物与混入杂质极性不同2、举例：石油醚—除叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素；乙醇——除蛋白质、多糖类等水溶性杂质。（二）碱提取酸沉淀法1、原理：黄酮类化合物易溶于碱性水。2、常用碱液：碳酸钠,氢氧化钠,氢氧化钙等例如：从槐花米提取芦丁过程槐花米→加6倍量水→煮沸→以石灰乳调pH=8-9→微沸30min→趁热过滤→

2、残渣再水煮一次→合并两次滤液→60-70℃时以浓盐酸调节pH=4-5→静置24小时→抽滤→水洗至中性→60℃干燥得粗品芦丁→沸水重结晶→70-80℃干燥得纯品芦丁。（三）碳粉吸附法1、适用范围：主要用于苷类的精制。2、使用过程：①植物甲醇粗提物，加入活性炭，检查上清；②沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇洗脱；③减压浓缩7%酚/水洗脱液至小体积；④乙醚除去残留的酚⑤水层中含有较纯的黄酮苷类。（四）聚酰胺吸附法1、聚酰胺对于黄酮类化合物是比较理想的吸附剂2、洗脱剂：不同浓度的乙醇、丙酮以及碱水3、分离效果：粗分例如：银杏叶黄酮的提取（五）超临界流体萃取法1、以CO2为单一流

3、体萃取极性较低的游离黄酮或黄酮的碳苷类；2、在CO2中加入水、乙醇等作为夹带剂，萃取极性较高的黄酮或黄酮苷类。例如：从甘草中提取黄酮类化合物，以CO2为单一流体可萃取极性较低的干草查耳酮A、B；在CO2-水-乙醇溶剂体系中则可提取极性较高的甘草素与异甘草素。与活泼型客户相处的原则多微笑说大白话多讲故事，少谈业务多保持一些神秘多提醒他趁热打铁让他多说，你多听与完美型客户交往的原则应表情严肃，衣着正规避免使用肢体语言多提供资料，少说注意你的细节不要夸张，要具体多进行感情上的沟通二、分离（一）柱色谱法1.硅胶柱色谱：①主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化

4、）的黄酮及黄酮醇类。②在加水去活化后可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。③硅胶中混存少量金属离子，应预先用浓盐酸处理除去，以免干扰分离效果。④分离黄酮苷元时，用氯仿-甲醇混合溶剂做移动相；⑤分离黄酮苷时，用氯仿-甲醇-水或乙酸乙酯-丙酮-水做移动相。2.聚酰胺柱色谱①可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括苷与苷元、查耳酮与二氢黄酮等。②分离的机理:主要为氢键吸附，其吸附强度主要取决于羟基的数目、位置以及溶剂的影响。③吸附规律如下:a.酚羟基数目越多，吸附力越强；b.如酚羟基所处位置易形成分子内氢键，则吸附力减小。c.分子内芳香程度越高、共轭双键越多，则吸附

5、力增强。总之，一般吸附力由大到小的顺序为：黄酮醇>黄酮>二氢黄酮醇>异黄酮④洗脱规律如下:不同类型黄酮化合物，先后流出顺序为：异黄酮>二氢黄酮醇>黄酮>黄酮醇b.相同苷元，洗脱先后顺序为：叁糖苷>双糖苷>单糖苷>苷元c.母核上增加羟基，洗脱速度即相应下降；d.羟基数目相同时，其位置影响洗脱顺序：邻位羟基黄酮>对位（或间位）羟基黄酮e.查耳酮比相应二氢黄酮难于洗脱。f.洗脱能力与介质有关水<甲醇或乙醇<丙酮<稀NaOH水溶液或氨水<甲酰胺<二甲基甲酰胺<尿素水溶液⑤若用含水移动相(甲醇/水)，则聚酰胺对苷元的吸附力较强；以有机溶剂(氯仿/甲醇)做移动相，则相反。3.葡聚糖凝胶

6、柱色谱①SephadexG（适用于水溶性成分分离）和SephadexLH-20（可用于亲脂性成分分离）②分离机理:※分离黄酮苷元时，吸附作用为主导取决于游离酚羟基的数目。※分离黄酮苷时，分子筛作用为主导,取决于分子量的大小。例如：黄酮苷元的洗脱顺序由易到难为5，7，4′-三羟基黄酮>3，5，7，3’，4′-五羟基黄酮>3，5，7，3’，4′，5’-六羟基黄酮④常用洗脱剂：碱性水溶液、含盐水溶液、醇及含水醇等。◈其它洗脱溶剂：含水丙酮、甲醇－氯仿等（二）梯度pH萃取法1、适用范围：酸性强弱不同黄酮苷元的分离。2、原理：根据黄酮类苷元酚羟基数目及位置不同其酸性强弱也不同的性质，

7、可以将总黄酮溶于有机溶剂后，依次用5%NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH及4%NaOH水溶液萃取，将黄酮按较强酸性至较弱酸性的顺序进行分离。3、分离规律如下：酸性溶解性7，4′-二OH5%NaHCO3液7-或4′-OH5%Na2CO3液一般OH0.2%NaOH液5-OH4%NaOH液（三）根据分子中某些特定官能团进行分离1、铅盐沉淀法：适用于具有邻二酚羟基的分离①具有邻二酚羟基的黄酮成分，可被中性醋酸铅沉淀；②不含邻二酚羟基结构的黄酮成分，可被碱性醋酸铅沉淀。2、硼酸络合法：具有邻二酚羟基的黄酮可与硼