肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药机制探究

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1、肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药机制探究作者：叶惠芬刘朝晖周小棉陈惠玲赵祝香【摘要】目的研究肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药机制。方法采用浓度梯度法(Etest)测定细菌对各种抗菌药物最低抑菌浓度，聚合酶链反应(PCR)扩增B内酰胺酶基因，并对扩增产物进行基因测序，用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)进行外膜蛋白(OMP)分析。用抑制试验进行主动外排机制检测。结果4株菌株全部携带有SHV12型和DHA1型超广谱B内酰胺酶(ESBLs)基因，3株携带CTXM14型ESBLs基因；4株菌外膜蛋白分析发现，肺炎克雷伯菌亚胺培南耐药株与敏感株相比，缺少分子量在32500〜47500之

2、间的一条带，从位置判断该条带可能为OMP36000或OMP37000的一种外膜蛋白；主动外排检测全部为阴性。结论同时产多种B内酰胺酶合并外膜蛋白缺失可能是导致本组肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药的原因。【关键词】肺炎克雷伯菌；B内酰胺酶；外膜蛋白ABSTRACTObjectiveToinvestigatethemechanismofKlebsiellapneumoniaeresistanttoimipenem・MethodsTheminimalinhibitiveconcentrations(MIC)oftheantimicrobialagentswasdeterminedbyEtest

3、.ThegenescodedtheBlactamasewereamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR),andthesequenceswereanalyzed.Outermembraneproteins(OMPs)wereanalyzedbysodiumdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis(SDSPAGE).Reserpineinhibitiontestwasusedtostudytheactiveefflux・ResultsAllofthe4strainsofK.pneumoniapro

4、ducedSHV12andDHA1genotype.Theyalsoproducedother0lactamase(CTXM14type,3isolates)・ComparedtoimipenemsensitiveisolatesbySDSPAGE,theimipenemresistantisolatesmarkedlylackedtheproteinbandofabout36.71kuwhichmightbetheoutermembraneproteinsofOmp36,000orOmp37,000accordingtotheelectrophoresismobility.The

5、activeeffluxtestwasnegative・ConclusionKlebsiellapneumoniaeproducedmorethanoneBlactamaseandthelossofoutermembraneproteinsmaybeaccountedfortheoccurrenceofimipenemresistance・KEYWORDSKlebsiellapneumoniae；Blactamase；Outermembraneprotein肺炎克雷伯菌为临床感染常见病原菌之一，可引起肺炎、尿路感染、败血症、伤口感染、脑膜炎等多种疾病。随着多重耐药菌株的日渐增多，治

6、疗该菌引起的感染变得越来越困难［1,2］。亚胺培南是碳青霉烯类抗生素，其对革兰阴性菌产生的超广谱B内酰胺酶及AmpC酶都很稳定，因此临床上亚胺培南一直是治疗革兰阴性菌感染的有效药物。近年来，由于亚胺培南的广泛使用，国内外均发现对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌，给治疗带来诸多困难。对亚胺培南耐药机制的研究以及如何减少其耐药株的产生，已成为当前该领域最为关注的焦点。我们对近年来在临床上分离的4株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行研究，现报道如下。1材料与方法1.1菌株来源收集我院住院感染患者送检痰样本中分离的亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌4株，其中从呼吸科和ICU病房分离各1株，神经科1株，干部病

7、房1株，全部按照《全国临床检验操作规程》第二版常规培养分离；菌株采用BioMerieux公司的VITEK2全自动鉴定系统鉴定。1.2药敏试验采用Etest法测定最低抑菌浓度(MIC),全部操作与结果判断均严格按照2005年美国临床实验室标准化研究所(CLSI)标准进行。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和产酶型大肠埃希菌ATCC35218o1.3ESBLs和AmpC酶检测采用酶提取物三维试验方法，按照文献［3］操作，以肺炎克雷伯菌ATCC700603和阴沟肠杆菌0