细菌形态与结构的检查法

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1、ZU细菌形态与结构的检查法［适用对象］屮医学（骨伤方向）、针灸推拿学专业［实验学时］3学时一、实验目的1、学会显微镜油镜的使用和保护方法。2、认识细菌的基本形态和特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）。3、掌握革兰氏染色方法。4、了解细菌的动力。二、实验原理1、显微镜油镜的使用原理：观察细菌必须用放大1000倍左右的油镜。油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，rtiT介质密度不同发生折射，射人镜筒的光线极少，视野暗、物象不清晰。如在玻片与镜头（透镜）Z间加上折光率和玻片（n二1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线

2、的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物像。2、革兰染色法的原理：主要是革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁有差异，另外革兰阳性菌的等电点比革兰阴性菌低，与碱性染料的亲和力强。三、仪器设备1、显微镜2、细菌标本片：（1）葡萄球菌（革兰染色）（2）大肠杆菌（革兰染色ZU细菌形态与结构的检查法［适用对象］屮医学（骨伤方向）、针灸推拿学专业［实验学时］3学时一、实验目的1、学会显微镜油镜的使用和保护方法。2、认识细菌的基本形态和特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）。3、掌握革兰氏染色方法。4、了解细菌的动力。二、实验原理1、显微镜油镜的使用原理：观察细菌

3、必须用放大1000倍左右的油镜。油镜的透镜极小，工作焦距最短，光线通过玻璃和空气，rtiT介质密度不同发生折射，射人镜筒的光线极少，视野暗、物象不清晰。如在玻片与镜头（透镜）Z间加上折光率和玻片（n二1.52）相近的香柏油（n=1.515）就可减少光线的折射，加强视野的亮度，获得清晰的物像。2、革兰染色法的原理：主要是革兰阳性菌与革兰阴性菌细胞壁有差异，另外革兰阳性菌的等电点比革兰阴性菌低，与碱性染料的亲和力强。三、仪器设备1、显微镜2、细菌标本片：（1）葡萄球菌（革兰染色）（2）大肠杆菌（革兰染色（3）霍乱弧菌（革兰染色）（4

4、）伤寒杆菌（鞭毛染色）（5）肺炎球菌（荚膜染色（6）破伤风杆菌（芽胞染色）萄球菌、绿脓杆菌的琼脂斜面18〜24小时培养物。4、染色液有结晶紫、碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红。U!相关知识点细菌是一类体积微小的单细胞原核细胞烈微生物，活的菌体小而透明，当把细菌悬浮于水滴内，用普通光学显微镜观察时，由于菌体和背景没有显著的明暗差，因而难以看清它们的形态，更不易是别其结构，所以，用普通光学显微镜观察细菌时，往往要先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用，可以更清楚地观察到细菌的形状及某些细胞结构。因此，为了研究细菌的形态特征和鉴别不同

5、类群的细菌，细菌的染色及形态构的观察是位生物学实验中十分重要的基本技术。五、实验步骤显微镜油镜的使用显微镜使用方法①将显微镜平稳的安放在试验台适宜处②用低倍镜对光，调节反光镜，天然光源用平面反光镜，人工光源或光线较弱使用凹面反光镜。检查染色标本要用强光，应将聚光器升到最高，光圈完全开大；若检查未染色的活休标本则用弱光，聚光器适当下降，光圈适当缩小。③标木片上加镜油一滴，转动粗螺旋，使油镜头缓缓下降，用眼从侧面观察，直到油镜头浸入油屮接近玻片为止（注意下降油镜头时不要用力过猛过急，以免压碎玻片或损坏镜头）。④用左眼从接冃镜观察，徐

6、徐转动粗螺旋提升镜头，见模糊物像后再用细螺旋调节即见到清晰物像为止。⑤油镜头使用后应立即用擦镜纸擦净镜头上的油。如油已干，可在镜头纸上滴少许的二甲苯擦拭，并立即用干的擦镜纸擦去二甲苯，因二甲苯能溶解镜头上的固定胶以致使镜片脱落，所以应及吋擦去二甲苯。显微镜的保护①显微镜是精密仪器，使用时要精心保护，不得随意拆散和碰撞,所有光学部分都不能用手指、布、普通纸擦拭。②取送显微镜时应右手持镜臂，左手托镜座，平端于胸前。③显微镜的光学部分应避免日光直射。④不用时，将接物镜转开成八字降至最低，使其不对准聚光器，聚光器下降，罩上镜套或放到显微

7、镜箱中。观察细菌的基本形态与特殊结构1、用油镜观察下列细菌的示教片（1）葡萄球菌（革兰染色）（2）大肠杆菌（革兰染色（3）霍乱弧菌（革兰染色）（4）伤寒杆菌（鞭毛染色）（5）肺炎球菌（荚膜染色（6）破伤风杆菌（芽胞染色）注意：各菌的形态、排列和染色性以及特殊结构特点等性状。2、将观察到的结杲，画在报告纸上并加以适当的描述。注意：微生物标本片,多用涂片法制成，观察完毕,不能用力擦去玻片上的镜油，只能用擦镜纸轻轻压吸或滴一滴二甲苯用擦镜纸轻拉。示教片看完处理后应放回原处，自己涂的玻片看完后应放入消毒缸内。革兰染色法1、细菌标本片的制

8、作(1)涂片：无菌操作。取•接种环&理盐水放于载玻片的一端，，用接种环刮取少许绿脓杆菌或葡萄球菌培养物与盐水混匀，涂布成直径约lcm的涂片(若采用液体培养物，勿加生理盐水，直接釆取1〜2环菌液即可)。涂片应薄而均匀。(2)干燥：涂片最好在温室中自然干燥。必要时可