细菌形态与结构检查法-公卫执业医师辅导.docx

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1、细菌形态与结构检查法-公卫执业医师辅导一、显微镜放大法细菌形体微小，肉眼不能直接看到，必须藉助显微镜放大后才能看到。普通光学显微镜普通光学显微镜（lightmicroscope）以可见光（日光或灯光）为光源，波长0.4～0.7μm，平均约0.5μm.其分辨率为光波波长的一半，即0.25μm.0.25μm的微粒经油镜放大1000倍后成0.25mm，人的眼睛便能看清。一般细菌都大于0.25μm，故可用普通光学显微镜予以观察。电子显微镜电子显微镜（electronmicroscope）是利用电子流代替可见光波，

2、以电磁圈代替放大透镜。电子波长极短，约为0.005nm，其放大倍数可达数十万倍，能分辨1nm的微粒。不仅能看清细菌的外形，内部超微结构也可一览无遗。电子显微镜显示的形象，可投射到荧光屏上，也可照像拍摄。当前使用的电子显微镜有两类，即透射电子显微镜（transmissionelectronmicroscope，TEM）和扫描电子显微镜（scanningelectronmicroscope，SEM）。SEM的分辨率一般较TEM低，但可清楚地显露观察物体的三维立体图像医学

3、教育网整理。配合电子显微镜观察使用的标

4、本制备方法有用磷钨酸或钼酸铵作负染色、投影法（shadowing）、超薄切片（ultrathinsection）、冰冻蚀刻法（freezeetching）等。电子显微镜标本须在真空干燥的状态下检查，故不能观察活的微生物。此外，尚有暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）、相差显微镜（phasecontrastmicroscope）、荧光显微镜（fluorescencemicroscope）和同焦点显微镜（cofocalmicroscope）等，适用于观察不同情况下的细菌形态和（或）结构。二、

5、染色法细菌体小半透明，经染色后才能观察较清楚。染色法是染色剂与细菌细胞质的结合。最常用的染色剂是盐类。其中，碱性染色剂（basicstain）由有色的阳离子和无色的阴离子组成，酸性染色剂（acidicstain）则相反医

6、学教育网搜集整理。菌细胞富含核酸医学

7、教育网整理，可以与带正电荷的碱性染色剂结合；酸性染色剂不能使细菌着色，而使背景着色形成反差，故称为负染（negativestaining）。染色法有多种，最常用最重要的分类鉴别染色法是革兰染色法（Gramstain）。该法是丹麦细菌学家革兰（Hans

8、ChristianGram）于1884年创建，至今仍在广泛应用。标本固定后，先用碱性染料结晶紫初染，再加碘液媒染，使之生成结晶紫—碘复合物；此时不同细菌均被染成深紫色。然后用95%乙醇处理，有些细菌被脱色，有些不能。最后用稀释复红或沙黄复染。此法可将细菌分为两大类：不被乙醇脱色仍保留紫色者为革兰阳性菌，被乙醇脱色后复染成红色者为革兰阴性菌。革兰染色法在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性等方面都具有极其重要的意义。革兰染色法的原理尚未完全阐明。但与菌细胞壁结构密切相关，如果在结晶紫—碘染之后医学

9、教育网

10、整理，乙醇脱色之前去除革兰阳性菌的细胞壁，革兰阳性菌细胞就能够被脱色。目前，对革兰阳性和革兰阴性菌细胞壁的化学组分已十分清楚，但对革兰阳性菌细胞壁阻止染料被溶出的原因尚不清楚。细菌染色法中尚有单染色法、抗酸染色法、以及荚膜、芽胞、鞭毛、细胞壁、核质等特殊染色法。