POWERPOINT 演示文稿 - 生物实验中心

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1、实验4叶绿体色素的提取、分离、理化性质和叶绿素含量的测定实验目的：掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。一、实验原理1、溶解性。叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取。2、吸附性。滤纸对Chlb、Chla、叶黄素的胡萝卜素的吸附能力不同(？)，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。？？？？C32H30ON4MgCOOCH3COOC20H39+2KOHC32H30ON4MgCOO—COO—+2KOH+CH3OH+C20H39OH3、皂化反应。叶绿素是二羧酸酯，与强碱反应，

2、形成绿色的可溶性叶绿素盐，就可与有机溶剂中的类胡萝卜素分开。？？4、取代反应。在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg++可依次被H+和Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。H+取代Mg2+,Cu2+(Zn2+)取代H+。CCCCNCCCCNCCCCNCCCCNHHCCHHCCCH2CHCH3R1—H2CH3C——CH3CCCCNCCCCNCCCCNCCCCNCuCCHHCCCH2CHCH3R1—H2CH3C——CH3褐色绿色5、叶绿素受光激发，可发出红色荧光，反射光下可见红色荧光。透射光下呈绿色反射光下呈红色6、定量分析。叶绿素吸收红光

3、和蓝紫光，红光区可用于定量分析，其中645和663用于定量叶绿素a,b及总量，而652可直接用于总量分析。abRelativeabsorbtanceWaverlength(nm)材料：菠菜。三、方法和结果：1．定性分析：鲜叶5g+95%30ml（逐步加入）,磨成匀浆过滤入三角瓶中观察荧光现象透射光色，反射光光。色素分离在滤纸中心缓慢滴入30滴提取液略干后滴入石油醚直到接近滤纸边缘用笔注出成分和颜色结果附于实验报告中。皂化反应加KOH数片剧烈摇均，加石油醚5ml和H2O1ml分层后观察上层呈色，为，吸收光。下层呈色。为。吸收光。取代反应（1）加醋酸约2

4、ml，变褐（叶绿素）取1/2加醋酸铜粉加热变色，为叶绿素。取代反应（2）：鲜叶2-3cm2，加Ac-AcCu20ml加热。观察：min变为色的叶绿素，min后，变为色的叶绿素。2．叶绿素定量分析：鲜叶0.1g，加1.9mlH2O，磨成匀浆，各取0.2ml加80%丙酮4.8ml,摇匀，4000转离心3min,上清液在645，652，663测定OD，计算Chla,Chlb和Chl总量的值。四、结果计算Ca(mg/L)=12.7OD663-2.69OD645Cb(mg/L)=22.9OD645-4.68OD663CT(mg/L)=Ca+Cb=OD65210

5、00/34.5Chla含量(mg/g.FW)=（Ca(mg/L)/1000）2/0.15/0.2Chlb含量(mg/g.FW)=（Cb(mg/L)/1000）2/0.15/0.2Chl总含量(mg/g.FW)=（CT(mg/L)/1000）2/0.15/0.2五、分析讨论