实验九叶绿体色素的提取分离与理化性质鉴定【资料】

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1、实验九叶绿体色素的提取分离与理化性质鉴定一、实验目的1、学会叶绿体色素提取和分离的方法。2、了解叶绿体色索的荧光现象、皂化反应等理化性质。二、实验原理叶绿体中含冇绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两人类，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醉或丙酗等启机溶剂提取。提取液可用色层分析的原理加以分离。因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动吋，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。叶绿素是一种二竣酸——叶绿酸与卬醇和叶绿醇形成的复杂

2、酯，故町与碱起皂化反应而生成醇（甲醇和叶绿醇）和叶绿酸的盐，产生的盐能溶于水中，可用此法将叶绿素与类胡萝卜素分开；叶绿素与类胡萝卜索都具有光学活性，叶绿索吸收光量子而转变成激发态，激发态的叶绿素分子很不稳定，当它变回到基态吋可发射出红光量子，因而产纶荧光。叶绿素中的镁可以被川所取代何成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素，铜代叶绿素很稳定，在光下不易破坏，故常用此法制作绿色多汁植物的浸渍标木。三、实验器材新鲜的植物叶片。研钵；漏4:100ml三角瓶;玻璃棒；剪刀;滴管;培养皿;定性滤纸条（5cmX1.5cm）o毛细管；试管；试管架;石棉网;烧杯（1

3、00ml）；酒精灯;铁三角架;刻度吸量管2nd、5ml各1支。四、实验试剂1、95%乙醇；石英砂；碳酸钙粉2、推动剂：按石油醯：丙酮：苯（10：2：1）比例配制（体积比）3、酷酸铜粉末；5%的稀盐酸4、甲醇、KOH五、实验步骤1、叶绿体色素的提取（1）取菠菜或其他植物新鲜叶片4〜5片（2g左右），洗净，擦干，去掉屮脉，剪碎，放入研钵中。（2）研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉，加2〜3ml95%乙醇，研磨至糊状，再加10ml95%乙醇，暗处放置3~5min,上清液过滤于三角瓶中,残渣用10ml95%乙醇冲洗,一同过滤于三角瓶中。2、叶绿体色素的分离（1）取一块预先

4、干燥处理过的定性滤纸，将它剪成长约10cm,宽约lcm的滤纸条。（2）川毛细管吸取色索捉取液。在滤纸条的一端（约距这一端的lcm处）划出一•条滤液细线，等滤液干燥后，再重复划4〜5次。（3）将滤纸条的另一端（约距这一•端1cm处）折成“V”字形，并将它挂在放有层析液的烧杯壁上（注意：色素线要略高于层析液面，且滤纸条下端最好不要碰到烧杯壁），盖上培养皿3、叶绿体色素的性质鉴定（1）荧光现象的观察取1支20ml刻度试管加入5ml叶绿体色索乙醇提取液，在直射光下观察溶液的透射光少反射光颜色有何不同？解释原因。（2）皂化作用（绿色素与黄色素的分离）在做过荧光现象观察的

5、叶绿体色素乙醇提取液试管屮加入1.5ml20%K0H-甲醇溶液，充分摇匀。片刻后，加入5ml苯，摇匀，再沿试管壁慢慢加入1〜1.5ml蒸憎水，轻轻混匀（勿激烈摇荡），于试管架上静置分层。若溶液不分层，则用滴管吸取蒸饰水，沿管樂滴加，边滴加边摇动，直到溶液开始分层吋，静置。可以看到溶液逐渐分为两层，下层是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的叶绿素a和b（以及少量的叶黄素）；上层是苯溶液，其中溶有黄色的胡萝卜素和叶黄素。⑶FT和CiT对叶绿素分子中Mg*的取代作用取上述色素乙醇捉取液少许于试管中，加入5%IIC1数滴，摇匀，直至溶液出现褐绿色,当溶液变褐麻，再加入少量酷酸

6、铜粉末，微微加热，观察记载溶液颜色变化情况。六、注意事项1、为了避免叶绿素的光分解，操作应在弱光下进行。2、研像时间尽町能短些，以不超过两分钟为宜。3、在低温下发生皂化反应的叶绿体色素溶液，易乳化而出现白絮状物，溶液浑浊，H•不分层。可激烈摇匀，放在30〜40°C的水浴中加热，溶液很快分层，絮状物消失，溶液变得清澈透明。七、实验报告1、将纸层析法分离叶绿体色素的实验结果贴在实验报告纸上，并给予分析。八、思考题1、研磨提取叶绿素时加入CaC03有什么作用？2、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和胡萝卜素在滤纸上的分离速度不一样，这与它们的分子量有关吗？精品资料，你值得拥

7、有!